抗病毒人源抗体库的构建及中和抗体的筛选、表达和生物活性的研究

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1、段金柱博士毕业论文摘要中文摘要早在一个世纪前免疫血清就已被成功地应用于传染性疾病的治疗。2003年当全球面对突如其来的SARS爆发流行时，再次证明恢复期病人免疫血清是一种安全而有效的治疗方法。鉴于免疫血清的来源有限，我们利用抗体库技术制备了SARS病毒特异的人源抗体库，并从中筛选出一些具有中和活性的抗体。另外，论文还包括狂犬病毒特异人源抗体库的构建以及抗乙肝表面抗原全分子抗体的真核表达研究。具体结果如下i.SARS病毒人源抗体库及中和性抗体的构建和生物活性鉴定从四位SARS恢复期病人外周血分离淋巴细胞，构建了SARS病毒特异人源

2、抗体库，库容量为1.83X10'。通过免疫亲和筛选，获得了两株特异识别SARS病毒颗粒的单链抗体，H12和B1。二者与SARS病毒颗粒结合的亲和力Kd分别为73.5nM和105nM。抗体H12和BI均能够竞争抑制SARS免疫血清与SARS病毒颗粒的结合，并且阻止SARS病毒S蛋白介导的细胞感染过程。抗体中和表位研究发现，这两种抗体识别不同的抗原表位口H12识别一个由Sl-Fc寡聚体组成的构象依赖型抗原表位，而B1识别一个线性的抗原表位，位于S20023-1189)。病毒中和活性实验表明，这两种抗体都能够有效阻止SARS病毒S蛋白

3、介导的细胞感染过程。实验结果不仅为SARS免疫治疗提供了具有应用价值的中和性抗体，而且通过抗原表位分析，有助于理解SARS病毒的免疫原性，为SARS疫苗的研究提供新的信息。2，狂犬病毒人源抗体库及其中和·抗体的构建和筛选狂犬病是一种由狂犬病毒引起的以脑脊髓炎为特征的急性传染病，人和动物一月.发病死亡率100%。中和抗体是狂犬病毒暴露后紧急治疗最有效的措施之一，但是目前堕缺治疗性人源抗体。本论文构建一个库容量为1.63X10'，多样性丰富的狂犬病毒特异抗体库，并从中筛选出一株狂犬病毒特异抗体D8。进一步研究了单链抗体D8的表达、纯

4、化和生物活性鉴定。实验结果表明，单链抗体D8与狂犬病毒的亲和力Kd为800nM,能够显著抑制狂犬病毒人免疫血清与狂犬病毒的结合。该抗体库的建立采用了可体内重组的载体，这为筛选多种不同抗原决定憾士论文题日抗病毒人源抗体库的构建及中和抗体的筛选、表达和生物活性的研究簇的中和抗体，实现狂犬病抗体鸡尾酒疗法奠定了工作基础。3.沉乙肚表曲抗原全分子抗体的真核表达在利用抗体库技术获得抗HBs魄单链抗体的基础上，研究抗HBsAg全分子抗体高表达对于抗体的产业化和实际应用，以及更好的预防和治疗乙型肝炎均意义重大。为此，我们采用了DHFRSV40

5、启动子转录活性弱化的DHFR/MTX扩增系统，研究了抗HBsAg全分子抗体真核表达。通过MTX对转染细胞系逐步加压筛选，并进行了亚克隆筛选，获得了两株稳定表达细胞系HBsAg-B和HBsAg-F，工gG表达水平达到9.611g/106细胞/24小时和13.51盯106细胞/24小时。同时，应用金属离子锌和锡激活IgG的小鼠金属硫蛋白启动子的诱导表达，确定了最佳诱导浓度.HBsAg-B与HBsAg-F的最佳锌离子浓度和锡离子浓度一致，分别为50umoI/ml和0.125umol/mloHBsAg-B与HBsAg-F诱导表达量最高分

6、别可达16.311g/106细胞/24小时和21.511g/l护细胞/24小时，本试验为进一步制各纯化抗HBsAg人IgG提供了条件，同时对真核表达全分子抗体技术做了有益尝试。关键词:噬菌体抗体库，SARS-CoV，狂犬病毒，中和性抗体，真核细胞表达完整抗体段金柱博士毕业论文摘要ConstructionOfHumanImmunizedPhage-DisplayLibraryAndIdentificationOfNeutralizingAntibodyForPreventionOfInfectiousDiseaseJinzhuDu

7、nn(Microbiology)Directed勿Dr.X扮unYanAbstractPassiveimmunizationhasbeenproventobeaneffectiveandsafeforthepreventionandtreatmentofemergencyviraldiseaseforacenltury。.Duur行ngmthesevereworldpanicofSARS-CoV,ithasbeenreportedthathightitersofprotectingIgGantibodytoSARS-CoVare

8、presentinconvalescentserum,andSARSpatientsshowclinicalimprovementiftheyaregivenserumfrompreviouslyinfectedpatients.Inordertofindefe