HE染色程序及相关溶液配制

《HE染色程序及相关溶液配制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、HE染色程序1．取材与固定：一般取0.5立方米，基本不用再次修形。置于4%甲醛溶液中，至少固定24小时。室温保存即可。2．水洗：视组织块大小而定。一般与固定时间相等或至少水洗24小时。3．脱水：70％酒精（过夜或2h）→80％酒精（过夜或1h）→90％酒精（1h）→95％酒精Ⅰ（1h）→95％酒精（1h）Ⅱ→100％酒精Ⅰ(1h)→100％酒精Ⅱ(1h)，梯度酒精脱水注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100%的酒精，注意观察组织块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。如果水脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。4、透明：二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ

2、(10min)。5、浸蜡：58℃1.5-2h（一般用新蜡）6、包埋：叠好的蜡槽，一般深1cm，宽1cm，长7cm，放4个组织块为宜。注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。包埋时用来夹取组织块的镊子，要同时放在蜡箱里预热。先向蜡槽内倒蜡，然后用预热的镊子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。包埋后，就不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。7、常规切片，一般组织3-5微米，神经组织切7微米。展片温度为52摄氏度。捞片时刻直接从95%的酒精中取载玻片直接捞片，不必擦干载玻片上的酒精。捞好片后，置于37度温箱恒温干燥过夜。8、切片脱蜡：二甲苯Ⅰ（5min）→二甲苯Ⅱ(8min)

3、，9、水化：100％酒精（1min）→90％酒精(1min)→80％酒精(1min)→70％酒精(1min)10、水洗2-5min11、苏木素染色15-20min12、水洗至灰黄色13、分化：1%盐酸酒精分化30s至桃粉色，14、水洗返蓝：2-3h15、伊红染色：15min16、脱水：70％酒精（10s）→80％酒精（20s）→90％酒精（30s）→95％酒精（1min）→100％酒精(2min)→100％酒精(2min)17、二甲苯透明：二甲苯Ⅰ（5min）→二甲苯Ⅱ(5min)18、中型树胶封片，镜检。相关液体的配制：1、4%甲醛固定液：40%的甲醛溶液10ml+90ml蒸馏水

4、，摇匀即可。2、处理载玻片用的盐酸酒精：95%酒精100ml+36-38%盐酸1ml摇匀即可。3、分化用1%盐酸酒精：注：1%盐酸酒精配制：75%酒精99ml+36-38%HCL1ml即可。4、二甲苯：无需配制，用商品化得即可。5、各个浓度的酒精，均用100%的酒精或95%酒精按比例稀释配制即可。6、苏木素的配制：A液：铵明矾（硫酸铝按）55克加蒸馏水至600mlB液：苏木素6克加100%酒精50ml混匀C液：甘油150ml加甲醇150ml分别配制A、B、C液，将A与B混合过夜，用滤纸过滤后，加入C液，在温暖有阳光处照射1-2个月，使染料成熟，方可使用。7、1%伊红的配制（水溶性的

5、）：1克伊红（曙红B）加100ml蒸馏水即可，需放置于阳光下成熟一段时间。一般500ml染液中加入5-6滴醋酸，可以增强其着色力。HE染色原理;苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。所有化学试剂买“分析纯”级别的。甲醛：买回来的都是40%浓度的，回来自己配成4%的。二甲苯：买回来的直接用就行，无需配制。无水乙醇：95%乙醇：此两种浓度的酒精，用来配制90%，80%，70%浓度的酒精。苏木素：还有叫苏木精的。如果买粉末的话，就按上边给的配方配制，这样就需要铵明矾（硫酸铝按）常规药品，都好买。也有商品化

6、的，买现成的染液，直接就是液体的。伊红，又有叫曙红B，（千万别买错了，还有叫曙红Y的，这个不能用于HE染色）。粉末状的，按上面的配方自己配。也有现成的商品化的染液，就是价格略贵一些。蜡：有国产的，国产的比较便宜。有进口的。进口的比较贵，60-100元/kg价格不等。我们实验室以前买过进口的“徕卡”品牌的蜡，60元/kg。现在什么价格不知道了。新蜡，都会有气泡的，买蜡的时候，熔点要56-58℃。