《组培基本条》PPT课件

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1、第二章植物组织培养所需基本条件第一节培养基及其配制第二节  实验室的设置第三节常用仪器设备和器具第四节环境条件第五节组培方案的筛选第一节培养基及其配制一、培养基的成分无机盐（大量元素、微量元素）有机营养成分（糖、维生素、氨基酸）植物生长调节剂天然有机添加物质琼脂活性炭根据植物对元素的吸收量，分为：1、大量元素（大于0.5mmol/L）：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S；其中C、H、O为气体元素，其余6种为矿质元素。2、微量元素（小于0.5mmol/L）：Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、Cl（一）

2、、无机盐（一）无机盐1.大量元素（MS培养基为例）序号化学式用量（mg/L）1KNO319002NH4NO316503KH2PO41704MgSO4.7H2O3705CaCL2.4H2O440（一）无机盐2.微量元素（MS培养基）序号化学式用量（mg/L)1KI0.832H3BO36.23MnSO4.4H2O22.34ZnSO4.7H2O8.65Na2MoO4.2H2O0.256CuSO4.5H2O0.0257CoCl2.6H2O0.025（二）有机营养成分1、糖类种类：蔗糖、葡萄糖、果糖。其中以蔗糖最常用。

3、作用：提供碳源、能量、保持培养基的渗透压。用量：1%～5%。（二）有机营养成分2、维生素类常用的有Vc、B1、B6、B12、烟酸、生物素等。（二）有机营养成分3、氨基酸常用的有：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸等水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白（LH）是多种氨基酸的混合物，在培养基中也时常添加。（三）植物生长调节物质用量很小，但对外植体的生长和分化起着决定作用。影响最显著的是生长素类和细胞分裂素类。1．生长素类种类：2,4-D：2,4-二氯苯氧乙酸NAA：萘乙酸IAA：引哚乙酸IBA：引哚丁酸作用：诱导愈伤组织、胚状体的

4、产生，试管苗生根。2.细胞分裂素类种类KT：激动素（6-糠基氨基嘌呤）6-BA：6-苄基氨基嘌呤ZT：玉米素2-iP：2-异戊烯腺嘌呤。2.细胞分裂素类作用促进细胞分裂，由愈伤组织或器官上分化出不定芽，促进芽的增殖。3、根和芽形成的激素控制特点生长素与细胞分裂素的比值和绝对含量，控制着植物组织的形态发生。生长素/细胞分裂素比值高：有利于根的形成低：有利于芽的形成适中：维持原组织生长而不分化（四）天然有机添加物常用种类和浓度为：椰子乳10%酵母提取物0.5%番茄汁5%～10%香蕉泥100～200mg/L作用是提

5、供微量营养成分、生理活性物质和生长激素等。（五）琼脂从海藻中提取的一种高分子碳水化合物，作为凝固剂，不参与代谢。用量：0.6%～1.0%。（六）活性炭来源：用木炭粉碎加工形成。作用：吸附作用，减轻有害物质对培养物的毒害。吸附没有选择性，在吸附有害物质的同时，也吸附有用物质。使培养基变黑，有利于生根。用量：0.1％－0.5%。二、培养基的种类和选择1、基本培养基和完全培养基基本培养基：包括无机盐、维生素、氨基酸、糖和水等。完全培养基：在基本培养基的基础上，根据培养目的，添加其它一些物质。如：植物生长调节物质，天

6、然有机物（椰乳、香蕉泥等）。MS培养基配方硝酸铵1650硫酸锌8.6硝酸钾1900氯化钴0.025氯化钙440硫酸铜0.025硫酸镁370钼酸钠0.25磷酸二氢钾170碘化钾0.83硫酸亚铁27.8肌醇100EDTA-Na237.3烟酸0.5硼酸6.2盐酸吡哆素0.5硫酸锰22.3盐酸硫胺素0.1甘氨酸2mg/L2、基本培养基的种类种类：众多，有几百种，但较常用的仅一二十种。名称：多数以发明人的姓名来命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基(简称MS培养基)3、培养基的类型3.1高盐浓度

7、培养基：MS、B5等。适用于多数营养需求量较大的植物。3.2中等盐浓度培养基：Nitsh、Miller等大量元素浓度约为MS的1/2。3.3低盐培养基：WPM、White等。大量元素浓度约为MS的1/4。适用于木本植物的培养。4、培养基的选择不同植物、培养部位和培养目的应选择不同的培养基。在建立一个新的实验体系时，一般先由一种已被广泛采用的培养基开始（如MS、N6、B5等）。三、培养基的配制方法（一）、流程图（二）母液配制（以MS培养基为例）氯化钙铁盐大量元素微量元素有机物质配制MS培养基时母液的计算（二）、

8、母液的配制扩大倍数：10～100倍。意义：提高工作效率，减小称量误差。药品称量一次，就可以使用多次。1、母液配制原则相同类型的试剂混合；易沉淀的药品分开；母液浓度要适宜；用量要认真计算和核对；药品要准确称量。2、大量元素母液（扩大10倍）成分规定量(mg/L)称取量(mg)母液体积（ml)配1升培养基用量（ml)KNO3NH4NO3MgSO4.7H2OKH2PO4190016503701701900