apoptin原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

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1、万方数据第29卷第5期2008年10月西安交通大学学报(医学版)JournalofXi‘'anJiaotongUniversity(MedicalSciences)V01．29No．5Oct．2008Apoptin原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达王健生1，张明鑫1，段小艺2，王峥4，周苏娜1，张广健3，王全颖5，杨广笑5(1．西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科，2．西安交通大学医学院第一附属医院核医学科；3．西安交通大学医学院第一附属医院胸外科，陕西西安710061，4．I匹lJll大学华西医院，四川成都610041；5．西安华广生物工程公司

2、。陕西西安710025)摘耍：■的构建Apoptin的原核表达载体，并制备抗原物质Apoptin融合蛋白。方珐在获得Apoptin融合基因的基础上．成功构建了Apoptin的高效原核表达载体pET028a(+)·-Apoptin，将该质粒转化至大肠杆菌E．coliBL21(DE3)受体菌中，以IPTG对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果转化有Apoptin的原核表达载体pET-28a(+)一Apoptin的大肠杆菌EcoliBL21(DE3)经IPTG诱导后，经SDS-PAGE分析，在相对分子质量约17000的位置出现目的蛋白条带，大

3、小与Apoptin融合蛋白一致。t论Apoptin原核表达载体pET-28a(+)一Apoptin能够表达出Apoptin融合蛋白，为进一步的Apoptin研究和制备Apoptin抗体奠定了基础。关键词：Apoptin；原核表达载体；pET-28a(+)；大肠杆菌中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1671—8259(2008)05-0496一03ConstructionofaprokaryoticexpressionvectorforApoptinandexpressioninE．coliWangJianshen91，ZhangMingxin

4、l：，DuanXiaoyP2，WangZhen94，ZhouSunal，ZhangGuangjian：3，WangQ．uanying'5，YangGuangxiao"5(1．DepartmentofOncologySurgery；2．DepartmentofNuclearMedicine；3．DepartmentofThoracicSurgery，theFirstAffiliatedHospital，MedicalSchoolofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061；4．WestChinaHospital，Sichua

5、nUniversity，Chengdu610041；5．Xi’anHuaguangBioengineeringCompany，Xi’an710025，China)ABSTRACT：ObjectiveToconstructanApoptinprokaryoticvector，aimingto西roduccantigenicfusionproteinApoptin．MethodsTheApoptingenewasamplifiedfromthetemplateofplasmidpSSCHG／NT4．·Apoptin-HA2-TATbyPCR．TheApop

6、tinWassub-clonedintothemultipleclonesitesofplasmidpET-28a(+)togettheprokaryoticvectorofpET-28a(+)-Apoptin，whichWastransformedintoE．coilBL21(DE3)．ExpressionofE．coliBL21(DE3)WasinducedbyIPTG．ThespecificproteinexpressionwasdetectedbySDS-PAGE．ResultsThefusionproteinwasexpressedwithh

7、ighefficiencyinE．coilBL21(DE3)transformedbypET·28a(+)-ApoptinafterinductionwithIPTG．Thespecificfusionproteinhadanapparentrelatedmolecularwcightofabout17000kuasindicatedbySDA-PAGEanalysis．ConclusionTheApoptinprokaryoticexpressionvectorwithpET-28a(+)一ApoptincaneffectivelyexpressAp

8、optinfusionprotein，layingafoundationforfurthers