实验七脂肪酸的β-氧化

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1、脂肪酸的β－氧化一、目的了解脂肪酸的β－氧化作用。二、原理在肝脏中，脂肪酸经β－氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β－羟丁酸。乙酰乙酸、β－羟丁酸和丙酮总称为酮体。氧RCH2CH2CO-SCoAFAD脂酰CoA脱氢酶呼吸链化FADH2H20RCH=CH-CO-SCoA的β-烯脂酰CoA水化酶H2O生RCHOHCH2CO~ScoANAD+化β-羟脂酰CoA脱氢酶呼吸链NADHH20历RCOCH2CO-SCoAβ-酮酯酰CoA硫解酶CoASH程脂酰CoAR-CO~ScoA+CH3CO~SCoA乙酰CoA乙酰CoA乙酰CoA乙酰Co

2、A乙酰CoA乙酰CoATCAATP乙酰CoA乙酰CoA酮体的生成—肝脏--氧化硫解酶脂肪酸2CH3COSCoACH3COCH2COSCoA乙酰乙酰CoACoASHCH3COSCoAHMG-CoA合成酶CoASHHMG-CoAOH裂解酶

3、CH3COCH2COOHHOOCCH2-C-CH2COSCoA

4、乙酰乙酸CH3脱羧酶羟甲基戊二酸单酰CoA脱氢酶NADH+H+（HMGCoA）NAD+CO2CH3CHOHCH2COOHCH3COCH3--羟丁酸丙酮本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠溶液滴定。•在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反

5、应式如下：2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2O•CH3COCH3+3NaOI→CHI3+CH3COONa+2NaOH•碘仿•剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。•NaOI+NaI+2HCl→I2+2NaCI+H2O•I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI•根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量三、器材酸式滴定管水浴锅移液管剪刀及镊子漏斗等四、试剂与材料鲜猪肝淀粉氯化钠丁酸三氯乙酸氢氧化钠盐酸碘等1.肝糜制备取新鲜肝脏，用0.9%氯化钠溶液洗去污血。用滤纸吸去表面的水分。称取肝组织5g置研钵中。加少量0.9%氯化钠溶液,研磨成细浆。再加0.

6、9%氯化钠溶液至总体积为10mL。2.取2个50mL锥形瓶，各加入3mL1/15mol/LpH7.6的磷酸盐缓冲液。向一个锥形瓶中加入2mL正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入2mL肝组织糜。混匀，置于43℃恒温水浴中保温1小时。3.沉淀蛋白质保温1时后，取出锥形瓶，各加入3mL15%三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加2mL正丁酸，混匀，静置15分钟后过滤。将滤液分别收集在2支试管中。4.酮体的测定吸取2种滤液各2mL分别放在另2个锥形瓶中，再各加3mL0.1mol/L碘溶液和3mL10%氢氧化钠溶液。摇匀后，静置10分钟。加入3mL10%盐酸溶液中和。然后用0.01mol/L标

7、准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。滴至黄色时，加入5～6滴淀粉溶液作指示剂。摇匀，并继续滴到蓝色褪去。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的mL数，并按下式计算样品中丙酮含量。5.计算肝脏的丙酮含量（mmol/g）=（A-B）×cNa2S2O3/6式中：A为滴定对照所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数；B为滴定样品所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数；cNa2S2O3为标准硫代硫酸钠溶液浓度（mol/L）。•谢谢