脂肪酸的-氧化

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1、实验七脂肪酸的β-氧化一、实验目的了解脂肪酸的β-氧化作用通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化作用的方法及其原理二、实验原理在肝脏中，脂肪酸经β氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。2NaOH+I2NaOI+NaI+H2OCH3COCH3+3NaOICHI3+CH3COONa+2NaOH剩余的碘用标准硫代硫

2、酸钠溶液滴定：NaOI+NaI+2HClI2+2NaCl+H2OI2+2Na2S2O3Na2S4O6+NaI碘仿本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。三、实验器材5ml微量滴定管恒温水浴吸管剪刀50ml锥形瓶漏斗试管及试管架四、试剂与材料鲜猪肝：0.5g/ml0.5%淀粉溶液0.9%氯化钠溶液0.5M丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml0.5M氢氧化钠溶液中15%三氯乙酸溶液10%氢氧化钠10%盐酸0.2M碘液：25.4gI2+50gKI定容到1000ml用

3、标准0.05M硫代硫酸钠标定标准0.01M硫代硫酸钠：将已标定的0.05M硫代硫酸钠稀释成0.01M1/15MPH7.6磷酸缓冲液：1/15MNa2HPO486.8ml+1/15MNaH2PO413.2ml五、操作步骤肝糜制备：取肝用0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去表面水分。称肝组织5g置研钵中，加少量的0.9%NaCl研成细浆。再加0.9%NaCl到总体积10ml。取2个50ml锥形瓶，各加入3ml1/15M磷酸盐缓冲液（pH7.6）。其中一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥形瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入2ml肝糜。混匀于43℃恒温水浴内保温1.5小时。沉淀蛋白：取出

4、锥形瓶，各加入3ml15%三氯乙酸，混匀，静置15min。对照瓶内追加2ml正丁酸，混匀。分别过滤，滤液收集在2支试管中。酮体测定：吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中，各加3ml0.1M碘液和3ml10%NaOH。摇匀，静置10min。加入6ml10%盐酸中和。用0.01M标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，加入3滴0.1%淀粉作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数。肝脏的丙酮含量（mmol/g）=（A—B）*CNa2S2O3*1/6*5A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的m

5、l数CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M）1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量5、结果计算