实验六植物DNA提取和分析

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1、实验六植物组织中DNA的提取和分析（P162）一、目的掌握植物组织中DNA提取的原理和方法。掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳检测方法。二、原理DNA是遗传的物质基础，分离纯化DNA是研究基因结构与功能的首要前提。细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去同时需要尽可能保证其DNA分子的完整性因此提取时应注意：在温和的条件下进行提取；注意避免核酸内切酶引起DNA的降解；酸、碱和离子强度等化学因素，以及温度、机械张力、剪切等物理因素可引起DNA的降解。二、原理植物组织中制备基因组DNA一般有下列几个策略：细胞壁的破碎通常将植物组织放在研钵中与液氯或

2、干冰一起研磨，形成粉末。保持在冰冻状态研磨以避免DNA的降解细胞膜的破坏常用去污剂(如SDS或CTAB)。保护DNA免受内源核酸酶的破坏去污剂的加入及EDTA的存在都能破坏或抑制酶的活性，EDTA是种螫合剂，它能结合大多数核酸酶的辅因子Mg2+。用氯仿和苯酚乳化DNA提取液，使蛋白质变性，分离蛋白质和DNA。尽量减少DNA的断裂即使溶液的振荡也会使DNA断裂除去多糖高等植物材料往往含有多糖，而多糖常常是某些限制酶或连接酶的抑制剂氯化铯密度梯度离心法CTAB的核酸提取法也可得到纯的高相对分子质量的DNA，它利用核酸和多糖在CTAB存在时溶解度不同而分离。二、原理二、原理提纯的DN

3、A为白色纤维状固体利用DNA易溶于盐溶液，微溶于水，不溶于一般有机溶剂（异丙醇、乙醇）的性质对其进行纯化。DNA分子在一定pH值缓冲液中带有电荷利用电泳可对其进行分离和研究。从植物幼苗、嫩叶中制备DNA产率高三、材料、仪器设备及试剂材料小麦幼苗仪器设备高速冷冻离心机、电泳仪、电泳槽、紫外灯、低温冰箱、微波炉、凝胶成像系统；三角瓶、烧杯、量筒、微量移液器、研钵、离心管试剂CTAB提取缓冲液：100mmol／LTris-HCI（pH值为8.0）；20mmol／LEDTA；1.4mol/L氯化钠。TE缓冲液：10mmol／LTris-HCI(pH值为8.0)；1mmoI／LEDTA氯

4、仿：异戊醇（24：1）异丙醇70%乙醇TAE电泳缓冲液：40mmol／LTris；20mmol／LHAC；1mmol／LEDTA上样缓冲液四、实验方法（一）植物组织中DNA的分离小麦芽0.1g，装入离心管，冷冻研磨捣碎加入0.5mLCTAB提取缓冲液65℃水浴10min，其间缓慢颠倒3次加等体积氯仿：异戊醇，缓慢颠倒混匀，冰浴5min8000rpm，10min将上层水相移入另一离心管加0.7倍体积预冷异丙醇，冰浴5min8000rpm，10min弃上清，沉淀用0.5ml70%乙醇悬浮弃上清，风干，加20μLTE溶解沉淀，即得DNA溶液8000rpm，10min四、实验方法（二）

5、DNA的电泳分析制胶制备0.8%的琼脂糖凝胶上样每个点样孔中加10μLDNA样品和2μL上样缓冲液电泳以5V/cm的电场强度电泳30min，溴酚蓝为示踪染料染色电泳结束后，将凝胶放入溴化乙锭溶液染色20min紫外灯下观察结果五、实验结果与分析分析DNA提取过程中各操作步骤的作用。心得六、讨论与心得