纯种分离1116

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1、《水处理生物学》实验报告开课实验室：学院城环年级、专业、班给排水03班姓名成绩课程名称水处理生物学实验项目名称测定细菌总数大肠菌群落数测定微生物纯种分离指导教师教师评语教师签名：年月日一、实验目的1掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤。2学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法。3学会几种接种技术。4学习无菌操作技术。二、实验原理受污染的水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降

2、解目标污染物的高效菌。从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。是快速高效获得目标菌的关键步骤。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。通过形成单菌落获得纯种的方法有

3、平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括两方面：1、在适合于待分离微生物的生长条件下（如营养、酸碱度、温度与氧等）培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。2、微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因

4、此，纯培养的确定除观察其菌落的特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。有的微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到一、实验器材培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、搪瓷杯、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪（枪头）、电子天平、滤纸、pH试纸等。二、实验步骤1、涂片左手持菌液EP管，右手持接种环，在火上对接种环灭菌后，从EP管中取一环培养液，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈），将接种环在火焰上烧灼灭菌

5、。若是从平板上取材，则事先在载玻片上滴一小滴水，在火焰附近把平板打开一小口，用接种环调取菌落边缘的物质涂于水滴上。室温下自然干燥。2、固定手持或镊子夹载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。3、初染滴加1滴草酸铵结晶紫染液，染色1分钟，水洗，吸干。4、媒染用碘液冲去残留水，再加1滴碘液覆盖涂片1分钟，水洗，吸干。5、脱色用吸水纸吸去玻片上的残留水，滴加95%的乙醇脱色，轻轻摇动玻片，倒掉脱色

6、液，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，吸干。脱色时间20~30秒。6、复染滴加1滴蕃红染液复染1-3分钟以上，水洗。7、显微镜观察吸干载玻片背面及标本周围水渍，先用4*10的倍数找到合适的视野，再油镜观察。一、实验结果一、讨论