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1、溉龙江商学院学报t自汰件学版)第9卷第3期V才Jl9NoJJOURNALO「IIEILONCJIANGCOMMERCIALCOLL〔G〔1993年9月写。P(NATURALSCI〔NC〔5EDI‘l‘【ON)萤光分光光度法测定果酒中苹果酸含量吕明吴艳华(墓础部)摘要就萤光分光光度法定量测定果酒中苹果酸含量的测定条件、影响因素,,和方法的可靠性等进行了探讨找出了最适条件并在此条件下对几种果酒中苹果酸进行了定量分析。此方法优于其他儿种常规分析法,对果酒在发酵、和成品贮藏等过程中苹果酸含量的变化进行跟除有一定的实用意义。关键词苹果酸,果酒
2、,萤光光度法,回收率,精密度中图分类号TS207.30657.39~告名..‘‘.0月U舌.,经基丁二酸(malicacid)又称苹果酸广泛存在于未成熟的水果中。苹果酸也是果酒中主要的酸组分之一,含量通常仅低于酒石酸。苹果酸在生化代谢上较活跃,因此,在酒。c精发酵或果酒陈酿过程中易于被微生物分解代谢当采用裂殖酵母(shiZosacharomyces,prombe)进行酒精发酵苹果酸被分解生成乙醇和二氧化碳;如采用苹果酸一乳酸发酵,.a一laoro(m川ctifomentatin)苹果酸被转化成乳酸这些过程均使苹果酸的含量发生较大的变
3、化。无论在果酒生产还是科研工作中,为检查或控制发酵进程,对发酵汁或果酒中的苹果酸的含量进行定量分析都是十分重要的。,,在果酒的理化分析中苹果酸的准确定量是比较困难的多采用纸层析法或半定量分析。现有几种方法都存在较明显的缺点,如采用比色法进行定量,酒样中的酒石酸,,和乳酸均有干扰测定结果要用经验式加以校正而且还需知道酒石酸和乳酸的含量。这无疑使测定复杂化,也必将带来较大的误差。苹果酸定量的其他生物学方法也因催化酶本身特异性不高,易催化其他底物参加反应,致使测定结果产生较大的误差。此,、。外酶制剂和裂殖酵母的来源保存都会给分析工作带来一
4、定的困难为快速、准确地定量果酒中苹果酸含量,经查阅文献和进行条件试验,得到了萤光物质,生成的稳定条件建立了一种利用莹光分光光度法定量测定果酒中苹果酸含量的新方法。:1993一04一10收稿日期黑龙江商学院学报(自然科学版)1993年1材料和方法1.1材料和仪器1.1.1材料(1)3%(V/V)乙酸(.R.:G北京化工厂)(0.5%V/V)乙G.R.;2)(酸(北京化工厂)(3)强碱型阴离子交换树脂(上海生化试剂厂);(4).5M硫A;0酸钠(:R丹东化工二厂)(5)80%(V/V)硫酸(G.R.北京化工厂);(6),0.25C.P,
5、地衣酚溶液称取09地衣酚(北京化工二厂)加入少许95%浓硫酸溶解后转,.移入50耐容量瓶中用浓硫酸稀释定容至刻度(7)标准苹果酸溶液:精称L一P上0.10009,D苹果酸(C海化学试剂总厂)用去离子水溶解后,定容到100ml,备用。浓度为l.omg/ml。1.1.2仪器(l)ShimadzuRF一510萤光分光光度计(日本岛津);.,、玻璃层析柱lem4oem:(2)中长(3)蒸汽浴锅;(4)25ml带塞比色管:(5)微量进样器(50川)。LZ实验方法1.2.1方法原理.一一n苹果酸在浓硫酸中与地衣酚(5一甲基一13一苯二酚;5me
6、thylresorciol)加热反,,应脱水缩合并脱去一个梭基生成7一轻基一5一甲基香豆素(7一hydroxyl一5一Methyl一eoumarin:)H。HCOOH浓硫酸HO一C一H一-卜一△-:了CH}CH3COOH地衣酚L苹果酸7一一5一经蓦甲荃香豆索,,7一经基一5一甲基香豆素有强烈的萤光在一定条件及浓度范围内萤光物质的浓,,度与萤光强度成正比故可用萤光光度计测定由苹果酸标准液制备标准曲线可得所测酒样的苹果酸含量。,由于形成萤光产物的反应特异性很强酒样中的酒石酸和乳酸不参与形成萤光物第3期吕明等:萤光分光光度法恻定果酒中苹果
7、酸含量质。因此,对.测定结果没有干扰1.2.2层析柱的制备,,称取1009阴离子交换树脂于250d烧杯中选后用IN盐酸和IN氢氧化钠洗涤再用蒸馏水洗至中性。加入30%乙酸溶液浸泡24h,使其转变成乙酸根型.将树脂搅成悬,,,浮液通过漏斗迅速倒入塞好下口的玻璃层析柱中使树脂均匀沉降中间不能分节或存,.有气泡否则应重新装柱.装柱体积约为30回.柱内树脂沉降完后,用7Oml05%乙酸溶液以每秒1~2滴的流速平衡层析柱。1.2.3酒样中苹果酸的分离,将平衡后的层析柱上层溶液放出至高于树脂表面约Zrnrn处沿柱壁缓慢加入10ml,,。酒样以每
8、秒1~2滴的速度溶液使样品吸附于柱内用约10ml0.5%乙酸淋洗柱酸上,.、,样品使全部吸附于树脂上再用10Oml去离子水以同样流速洗脱糖色素等杂质最后.用05M硫酸钠溶液洗脱苹果酸等有机酸。收集洗脱液IO0ml于IO0ml容量瓶中,
