分光光度法测定茶叶中多糖含量

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1、中国药科大学成人教育学院毕业设计（论文）1绪论1.1茶多糖的结构与功能茶多糖是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质，是一种酸性糖蛋白,并结合有大量的矿质元素，称为茶叶多糖复合物，简称为茶叶多糖或茶多糖（TeaPolysaccharide）。其是蛋白部分主要由约20种常见的氨基酸组成，糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等，矿质元素主要由钙、镁、铁、锰等及少量的微量元素，如稀土元素等组成。现代药理研究证实，茶多糖具有降血糖、降血脂、降血压及减慢心率、耐缺氧的作用，同时茶多糖在抗凝血、防血栓形成、保护血相和增强人

2、体非特异性免疫功能方面均有明显效果[1]。1.2茶多糖测定的现状茶叶中多糖含量的测定对于提取茶多糖所用原料的选择及茶多糖提取工艺提取率高低的评价都具有重要的意义。汪东风等[2]研究表明对同一品种的红茶和绿茶，均为六级茶，茶多糖的含量，红茶为0.85％±0.10％，绿茶为1.41％±0.06％，但该研究是以葡萄糖作标准曲线，而实际上如王丁剐[3]、汪东风[4]等报道，茶多糖是由阿拉伯糖、核糖、木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等组成的杂多糖，其具体的单糖组成与茶叶的品种有关。而不同的单糖与蒽酮—硫酸试剂显色情况不同，不同单糖

3、标准曲线的斜率不同，因而仅采用葡萄糖做标准的测定结果，会存在一定的误差，结果比实际含量偏低。1.3本文研究内容本文用精制茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子，然后将经前处理除杂后的茶样用水提取，蒽酮一硫酸法比色测定，对江西婺源不同茶场茶叶中多糖的含量进行了测定，并与其它产地、品种的茶叶进行了比较。8中国药科大学成人教育学院毕业设计（论文）2实验部分2.1实验仪器与材料2.1.1实验仪器分光光度计，电子天平，水浴锅，旋转蒸发仪，真空干燥箱，离心沉淀机；2.1.2实验试剂蒽酮、浓硫酸、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇，以上试剂均

4、为分析纯；2.1.3实验原料江西婺源红碎茶、绿茶、分宜绿茶、福建安澳乌龙茶。2.2实验方法2.2.1实验原理选用精致茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子，然后将经前处理后的茶样用水提取，蒽酮—硫酸法比色测定，对不同茶场茶叶中多糖的含量进行测定。2.2.2茶叶多糖的提取与精制［5、6］称取已干燥的40目茶叶粉末20g，置索氏提取器中，加入石油醚(沸程60ºC一90ºC)lOOml，90ºC回流提取1h脱脂，抽滤，滤渣挥干溶剂后．加80％乙醇200ml，90ºC水浴回流lh，重复提1次，双层滤布过滤，滤渣加400ml蒸馏水，沸水浴

5、回流提取1h，间歇搅拌。双层滤布过滤，滤渣加200ml蒸馏水，沸水浴再回流提取1h，间歇搅拌，过滤，合并两次滤液，离心分离(400Or/min，10min)，真空浓缩(60ºC，50r/min，真空度0.095Mpa)至20ml,Sevage法除蛋白，反复进行三次至无蛋白层，然后用流动自来水透析48h，蒸馏水透析24h，透析液中加人无水乙醇使乙醇浓度达80％，于4ºC冰箱中过夜醇沉，再离心分离(400Or/min，10min)，沉淀依次用无水乙醇丙酮、乙醚各洗两次，真空干燥(45ºC，0.095Mpa)至恒重，即得精制茶多糖

6、。称重，计算得率，备用。2.2.3标准曲线的绘制[7、8]2.2.3.1标准溶液的配制精密称取105ºC干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2508g，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，配成1.O03mg/ml的标准溶液，然后分别提取2.5ml、5ml、lOml、15ml、20ml标准溶液，置于100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液。8中国药科大学成人教育学院毕业设计（论文）2.2.3.2蒽酮一硫酸试液的配制称取0.33g蒽酮，加100ml浓硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀置于冰箱中(现配现用)。2.2.3

7、.3吸光度的测定分别准确移取lml系列标准溶液于具塞试管中．以lml蒸馏水作空白，每管再加入4ml蒽酮—硫酸试液，立即摇匀，置于冰水浴中，然后一起置于沸水浴中加热7min．之后用流动自来水迅速冷至室温，放置10min后，于62Onm处测定吸光度。以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理，得回归方程：C=-0.00253+0.317A，r=0.9993。2.2.4换算因子的测定精密称取45ºC真空干燥至恒重的精制茶多糖10mg，置于25m1容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，90ºC水浴加热．超声1min增溶．摇匀，制得茶多

8、糖贮备液．蒽酮一硫酸比色法测定其吸光度(A)，由回归方程求出此精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后溶解性降低．故按2.2.2中的方法制得多糖透析液后取等量10ml透析液两份．经醇沉洗涤后，一份直接加蒸馏水溶解(复水性好)，定容，比色，测定多糖含