拟南芥叶片总RNA提取

《拟南芥叶片总RNA提取》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、拟南芥叶片总RNA提取拟南芥拟南芥是一种细长而直立的植物，羽状多叶，茎高度达40厘米。二年生草本，基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，直径约3毫米，白色，匙形，雄蕊6枚，花药黄色，雌蕊圆柱状，花柱短，柱头凹陷；果实豆荚形，长1～1.5厘米，薄，轻微向上弯曲，成熟时开裂；果瓣有1中脉及侧脉；种子1－2行，呈卵形，长约1毫米，成熟时红褐色；子叶背倚胚根。花期3～5月。拟南芥是在植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式生物之一。其在农业科学中所扮演的角色正彷

2、佛小鼠和果蝇在人类生物学中的一样。尽管拟南芥在农业上并无多少直接的贡献，但其优点使其成为研究有花植物的遗传、细胞、分子生物学的典型。拟南芥基因组之小有利于基因定位和测序。其基因组大约为12,500万碱基对和5个染色体，在植物中算是小的。在2000年，拟南芥成为第一个基因组被完整测序的植物。在探明至今已发现的25,500个基因的功能上已作出了非常多的工作。植株之小于生活周期之短同样也是拟南芥的优点。实验室常用的许多品系，从萌芽到种子成熟，大约为六个星期。植株之小方便其在有限的空间里培养，而单个植株能产生几千

3、个种子。此外，其自花传粉的机制也有助于遗传实验。所有这些都使拟南芥成为遗传研究的模式生物。RT-PCRRT-PCR是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。RN

4、A提取的常见问题RNA降解OD260/OD280比值偏低RNA含有DNA污染RNA提取量偏低提取的RNA不溶下游实验效果不佳RNA降解使用的组织材料不够新鲜。提取RNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。提取RNA时使用的试剂及器材中混有RNA分解酶。提取的组织材料中含有大量的RNA分解酶，而RNAisoPlus的添加量不够OD260/OD280比值偏低样品裂解时加入的RNAisoPlus量偏少，造成蛋白变性不充分，可以再次对RNA溶液进行苯酚/氯仿抽提，以

5、除去蛋白。含有裂解液的样品经匀浆混匀后未在室温静置，或静置的时间不足5分钟。相分离后，吸取上清液时不小心接触蛋白层造成污染。RNA未充分溶解。RNA中含有DNA污染裂解组织或细胞使用的RNAisoPlus量偏少。使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇、异丙醇等）、高浓度的Buffer、碱性溶剂等。如果提取的RNA中含有DNA时，可以使用DNaseI进行DNA消化。RNA提取量偏低向组织材料中加入RNAisoPlus后，充分研磨匀浆使其充分裂解。相分离后请尽量完全回收上清液。提取的RNA不溶75%乙醇

6、清洗沉淀后不要干燥时间过长或加热干燥。RNA沉淀中含有不溶的蛋白质混合物时，应注意在相分离后吸取上清液时，避免枪头接触蛋白层。下游试验效果不佳原因：1RNA降解2抽提剂残留（75%乙醇）3样品中杂质残留（有机相）4DNA污染谢谢