生物化学普通生物化学

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1、生物化学（普通生物化学）考研答疑蛋白质化学酶蛋白质的分解和氨基酸代谢核酸化学核酸的分解和核苷酸代谢生物氧化一、蛋白质的组成（元素组成，化学组成）二、蛋白质的结构（一级、二级、三级、四级结构）三、蛋白质的性质（等电点、分子量、胶体、沉淀反应、颜色反应、变性与复性）（一）蛋白质的元素组成：C、H、O、N及少量的S特点：N在各种蛋白质中的平均含量为16%因为样品含氮量平均在16%，取其倒数100/16=6.25，即为蛋白质换算系数，其含义是样品中每存在1g元素氮，就说明含有6.25g蛋白质）；故：凯氏定氮法蛋白质含量=蛋白质含氮量×6.25优点：对原料无选择性，仪器简单，

2、方法也简单。缺点：易将无机氮(如核酸中的氮)都归入蛋白质中。(二）蛋白质的水解1、完全水解：用浓酸、碱将蛋白质完全水解为氨基酸。酸水解：无消旋作用，产物为L-氨基酸。碱水解：多数氨基酸被破坏，有消旋现象。2、部分水解：一般用酶或稀酸在较温和条件下，将蛋白质分子切断，产物为分子大小不等的肽段和氨基酸。（三）氨基酸氨基酸是蛋白质水解的最终产物，是组成蛋白质的基本单位。从蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种，除脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸在结构上的共同特点为：(1)与羧基相邻的α-碳原子上都有一个氨基，因而称为α-氨基酸。(2)除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-

3、碳原子都为不对称碳原子。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。R（3）按R基团的极性分：极性氨基酸：极性不带电荷：丝、苏、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪、半胱、极性带正电荷：组、赖、精、极性带负电荷：天冬、谷、非极性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮、苯丙、甲硫、脯、色、（4）按人体是否可合成来分：必需氨基酸：机体不能自身合成，必须由食物供给的氨基酸。甲硫、色、赖、缬、异亮、亮、苯丙、苏、半必需氨基酸：人体可合成，但幼儿期合成速度不能满足需要。组*、精*、非必需氨基酸：机体可自身合成的氨基酸。（5）氨基酸的重要理化性质(1)光吸收：构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，

4、但在远紫外区(<220nm)均有光吸收。在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。酪氨酸的max＝275nm，苯丙氨酸的max＝257nm，色氨酸的max＝280nm，(2)氨基酸两性解离与等电点：氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。pH1pH11pH6在电场中，阳离子向负极移动；阴离子向正极移动；调整pH，使aa净电荷为零时，aa既不向阳极也不向阴极移动。规定aa净电荷为为零时的pH为该aa的

5、等电点R-R+R±pI=½（pK1+pK2）K1=[R±][H+][R+]K2=[R+][R-][H+]等电点相当于该aa两性离子状态两侧基团pK值之和的一半。a、各种aa的pI不同；b、同一pH下，各种aa所带电荷不同；pH＜pI：aa+在电场中向负极移动pH＞pI：aa-在电场中向正极移动用离子交换、电泳将aa分开c、处于pI时，aa溶解度最小，易沉淀；可分离aa。（3）氨基酸的性质（1）与茚三酮的反应：α-氨基酸与水合茚三酮溶液共热，引起aa氧化脱氨、脱羧，水合茚三酮与反应产物（氨和还原型茚三酮）生成兰紫色化合物（Pro和Hyp呈黄色），色深与溶液中氨基浓度成正

6、比。（2）与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸（3）与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应用于N末端分析，又称Edman降解法二、蛋白质的结构肽和肽键的结构肽（peptide)：一个氨基酸的α-羧基和另一氨基酸的α-氨基脱水缩合而成的化合物。由两个氨基酸组成的肽称为二肽，由多个氨基酸组成的肽则称为多肽。组成多肽的氨基酸单元称为氨基酸残基。通常在多肽链的一端含有一个游离的-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的-羧基，称为羧基端或C-端。多肽链共价主链为NCCNCCNCC的重复单位（一）蛋白质的一级结构1、蛋白质的一级结构(Pri

7、marystructure)即多肽链内氨基酸残基从N-末端到C-末端的排列顺序，或称氨基酸序列，是蛋白质最基本的结构。包括：(1)组成蛋白质的多肽链数目.(2)多肽链的氨基酸顺序，(3)多肽链内或链间二硫键的数目和位置。★其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。(2)测定步骤①多肽链的拆分（8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链）.②测定蛋白质分子中多肽链的数目。③二硫键的断裂：（过甲酸）④测定每条多肽链的氨基酸组成⑤分析多肽链的N-末端和C-末端⑥多肽链断裂成多个肽段⑦测定每个肽段的氨基酸顺序⑧确定肽段在多肽链