生物化学_普通生物化学实验-update.pdf

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1、生物化学基础实验教学课件生化与分子生物学实验室于乐军实验一生物化学实验安全及技能培训实验二Folin-wu法定量测定血糖的含量实验三蛋白质的等电点测定及盐析反应实验四Folin-酚试剂法测定蛋白质浓度实验五氨基酸的纸层析目实验六醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白录实验七胰蛋白酶的活力测定实验八酶促反应影响因素研究实验九酵母RNA的提取及鉴定实验十水果中维生素C的定量测定实验十一聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳牛血清生物化学实验技能培训通过生物化学实验应该做到：⑴学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。⑵训练实验的动手

2、能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。⑶学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验，培养严谨细致的科学作风。⑷掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。实验室规则⑴实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理。⑵实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。⑶实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想改进和设计新的实验方法，必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。⑷实验台面

3、、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整齐，药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品（尤其是NaOH）洒落在天平和实验台面上，毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。⑸配制试剂按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收；昂贵试剂需要回收，不得丢弃。⑹配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。⑺强酸强碱以及其他实验废液必须倒入废液桶。电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒

4、入废物桶。⑻使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。⑼实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。⑽实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，插好自动部分收集器上的试管，保持实验台面和实验柜内的整洁。⑾严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，学期结束时按规定进行处理。⒀每日实验完毕，值日生要认真做好实

5、验室的卫生值日工作。最后离开实验室的实验人员，必须检查并关好水、电、门、窗。Folin-Wu法定量测定血糖的含量糖的重要生理功能：1.氧化供能2.人体的主要组成成分之一糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成脂肪和某些非必需氨基酸等3.糖代谢紊乱→供能障碍→一系列代谢变化血糖及血糖水平的概念：血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖总维持在恒定水平：3.9∽6.7mmol/L血糖的来源和去路血糖测定的目的和意义临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。调节血

6、糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性高血糖症是糖尿病。糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病,系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。糖尿病的诊断标准症状＋随机血浆葡萄糖≥11.1mmol/L,或空腹血浆葡萄糖≥7.0mmol/L。症状不典型者需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任一时间采

7、血测得的血糖浓度。糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、多尿、多食及消瘦血糖的测定方法无机化学法：Folin-Wu法，特异性差测定有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法方法干扰因素多酶法：（1）己糖激酶法（HK）（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵一、目的要求•掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。•学会制备无蛋白血滤液。•掌握7200型可见分光光度计的使用方法。二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛

8、基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原