一种简单的分离_培养及鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞方法的建立_杨琳

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1、2015年8月首都医科大学学报Aug．2015第36卷第4期JournalofCapitalMedicalUniversityVol.36No.4［doi:10．3969/j．issn．1006-7795．2015．04．019］·基础研究·一种简单的分离、培养及鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞方法的建立*杨琳田蕾谢杰施李丽英(首都医科大学细胞生物学系，肝脏保护与再生调节北京市重点实验室，北京100069)【摘要】目的在L929条件培养基的作用下体外分离、培养小鼠外周血单核巨噬细胞，并进行鉴定。方法密度梯度离心法分离小鼠外周血单核巨噬细胞，用L929条件培养基培养

2、7d。采用免疫荧光的方法检测F4/80的表达以及细胞的吞噬作用，用流式细胞术进一步检测细胞吞噬率。结果用L929条件培养基诱导培养7d后小鼠外周血单核细胞表达F4/80，加入细胞吞噬珠之后，在不同时间点用荧光显微镜可以看到红色荧光颗粒聚集在小鼠外周血单核巨噬细胞核周围，用流式细胞仪检测细胞的吞噬率为24．8%±0．79%。结论该方法是一种简单、易操作的体外分离培养和鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞的方法。【关键词】小鼠;外周血单核巨噬细胞;分离培养;鉴定【中图分类号】Q2Establishmentofasimplemethodforseparation，cultu

3、reandidentificationofmouseperipheralbloodmonocyte/macrophage*YangLin，TianLei，XieJieshi，LiLiying(DepartmentofCellBiology，MunicipalLaboratoryforLiverProtectionandＲegulationofＲegeneration，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)【Abstract】ObjectiveTheaimofthisstudyistoseparate，cul

4、tivateandidentifymouseperipheralbloodmonocyte/macrophages(PBM)inL929－conditionedmedium．MethodsMousePBMwasisolatedbycentrifugation，andculturedwithL929-conditionedmediumfor7days．PBMwasidentifiedbyimmunofluorescenceandflowcytometry(FCM)．ＲesultsPBMdisplaytheimmunophenotypeofmonocyte/ma

5、crophageandwithphagocyticfunction．ConclusionItwasasimplemethodforseparation，cultureandidentificationofmousePBMinvitro．【Keywords】mouse;peripheralbloodmacrophages;isolationandcultivation;identification巨噬细胞是由血液中的单核细胞分化而来，单核1材料与方法细胞来源于骨髓中的造血干细胞，稳定状态下在外周［1-3］血、骨髓和脾中循环。巨噬细胞在体内扮演着重1．1实验材料

6、要的角色，它在抗感染、抗肿瘤和免疫调节中起着非1)动物:ICＲ小鼠(30只)，体质量28～30g，SPF常重要的作用。巨噬细胞广泛分布于机体的各个组级，5～6周龄，购于首都医科大学实验动物部，实验动织与器官中，如肝、脾、淋巴结、骨髓、胸腔、腹腔、血物许可证号:SYXK(京)2010-0020。液、皮肤等。L929是小鼠成纤维细胞株，其培养上清2)主要仪器:离心机(美国Eppendorf公司)，细含有较高浓度的巨噬细胞集落刺激因子，可以使巨噬胞培养箱(美国Thermo公司)，流式细胞仪(美国BD细胞活化，诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育。公司)，荧光显微镜(

7、日本Leica公司)。本实验以小鼠外周血单核巨噬细胞为研究对象，探索3)主要试剂:DMEM培养基(美国Gibco公司)，建立一种巨噬细胞体外分离培养和鉴定的方法。胎牛血清(英国Biochrom公司)，F4/80抗体(美国基金项目:国家自然科学基金(81430013)，北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目(IDHT20150502)。ThisstudywassupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(81430013)，ProjectofConstructionofInnovativeTe

8、amsandTeacherCareerDevelop