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时间：2019-07-14
《碱裂解法抽提大肠杆菌质粒》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、实验一碱裂解法抽提大肠杆菌质粒1、实验目的：学习与掌握碱裂解法抽提大肠杆菌质粒DNA的原理与方法2、实验原理：碱裂解法抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。3、实验步骤及各步注意事项1.取1.4ml大肠杆菌培养液12000rpm离心2min，弃上清，收集菌体。注意点：上清为培养基，必须尽量倾倒干净，并在吸水纸上吸干，如有较多培养基残留可能会影响后续实验。2.加100µl的溶液I，使菌体充分悬浮，室温静置3min。注意点：必须充分混匀至看不见沉淀，可用移液器吹打或者用混匀器振荡。
2、3.加入200µl溶液II，温和上下颠倒2-3次，溶液转变为澄清透明。注意点：不可剧烈振荡。4.加入150µl溶液III，上下颠倒混匀数次，静置2-3min。注意点：不可剧烈振荡，此时应出现白色沉淀。5.12000rpm离心5min。6.取上清，加等体积（400µl）的酚/氯仿/异戊醇，充分混匀，室温，12000rpm离心5min。注意点：酚氯仿有腐蚀性，盖严离心管盖，避免接触酚氯仿，如接触立即用水冲洗。7.吸上层水相，再加1ml(约2.5倍体积）预冷的无水乙醇，混匀。注意点：一定避免吸到中间沉淀及下层酚氯仿。宁可损失
3、一定上清。8.4℃，12000rpm离心10min。9.弃上清，加入0.5ml70％乙醇，4℃，12000rpm离心5min。10.弃上清，沉淀自然干燥10min后，加20µl无菌水溶解。注意点：弃上清时尽量将酒精倾倒干净，但注意不要将沉淀弃去。
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