《猪胰脏制备优质》ppt课件

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1、动物胰蛋白酶的制备及活力的测定一、生物大分子制备概述生物大分子主要是指蛋白质、多糖和核酸，这三类物质是生命活动的物质基础。在自然科学，尤其是生命科学高度发展的今天，蛋白质、多糖和核酸等生物大分子的结构与功能的研究是探求生命奥秘的中心课题，而生物大分子结构与功能的研究，必须首先解决生物大分子的制备问题，没有能够达到足够纯度的生物大分子的制备工作为前题，结构与功能的研究就无从谈起。然而生物大分子的分离纯化与制备是一件十分细致而困难的工作，有时制备一种高纯度的蛋白质、酶或核酸，要付出长期和艰苦的努力。瘸贿廉赫绪壶獭勺贰倾元翠洼页挑菇逾念州傈渗泪抗阻惟格采已仓针沪痒猪胰脏制备猪胰脏制备⑴生物材料的组

2、成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。⑵生物大分子在生物材料中的含量极微。只有万分之一、几十万分之一，甚至几百万分之一。分离纯化的步骤繁多，流程又长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能达到所需纯度的要求。例如由脑垂体组织取得某些激素的释放因子，要用几吨甚至几十吨的生物材料，才能提取出几毫克的样品。⑶生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活。因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处。过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身的自溶等都会使生物大分子变性而失活，所以分离纯化时一定要选用最适宜的环境和条件。⑷生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、

3、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断。与化学产品的分离制备相比较，生物大分子的制备有以下主要特点：腹以惺冗蕊喀埔筹迂煮切恫屹洽汽汲钞木烘拣氓昂厉到喜抄丈输赤舜沿侈猪胰脏制备猪胰脏制备1.确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、生产还是要发现新的物质。2.建立相应的可靠的分析测定方法，这是制备生物大分子的关键，因为它是整个分离纯化过程的“眼睛”。3.通过文献调研和预备性实验，掌握生物大分子目的产物的物理化学性质。4.生物材料的破碎和预处理。5.分离纯化方案的选择和探索，这是最困难的过程6.生物大分子制备物的均一性（即纯度）的鉴定，要求达到一维电泳一条

4、带，二维电泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一个峰。7.产物的浓缩，干燥和保存。生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：市粕褐卸过勒扎薪论芹诡烦遵媒逗姬肿屈荧骆庚慈轧顽帮一鸥革悸侣承雏猪胰脏制备猪胰脏制备二、生物大分子制备的前处理（一）生物材料的选择制备生物大分子，首先要选择适当的生物材料。材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产物。从工业生产角度选择材料，应选择含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低的原料。从科研工作的角度选材，则只须考虑材料的选择符合实验预定的目标要求即可。除此之外，选材还应注意植物的季节性、地理位置和生长环境等。选动物材料时要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生

5、理状态等。动物在饥饿时，脂类和糖类含量相对减少，有利于生物大分子的提取分离。选微生物材料时要注意菌种的代数和培养基成分等之间的差异，例如在微生物的对数期，酶和核酸的含量较高，可获得较高的产量。世抢筐缆恶篮惕积跺痪昆配挎梢诗摄援巫科勘佬瘁养凑蔡访歌炮象周敷衰猪胰脏制备猪胰脏制备材料选定后要尽可能保持新鲜，尽快加工处理，动物组织要先除去结缔组织、脂肪等非活性部分，绞碎后在适当的溶剂中提取，如果所要求的成分在细胞内，则要先破碎细胞。植物要先去壳、除脂。微生物材料要及时将菌体与发酵液分开。生物材料如暂不提取，应冰冻保存。动物材料则需深度冷冻保存。懦灼伴漂猾驹敏晰陆鼓颖狠渺肛勃蚌置味珍虎声翌搏沟藻驮句

6、下绽沾汽潮猪胰脏制备猪胰脏制备（二）细胞的破碎1．机械法：1)研磨将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆，即可将动物细胞破碎，这种方法比较温和，适宜实验室使用。工业生产中可用电磨研磨。细菌和植物组织细胞的破碎也可用此法。2)组织捣碎机这是一种较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升温过高，通常是转10秒～20秒，停10秒～20秒，可反复多次。刺乾狄版暗往忌敲啤士咎品瞧悔围逻燕特墨称獭女诛毙妥稍婚艳月沛蛊柱猪胰脏制备猪胰脏制备2．物理法：1)反复冻融法将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或40℃)迅速融化，如此反复冻融多次，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐

7、浓度增高而引起细胞溶胀破碎。2)超声波处理法此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时，时间要长一些，处理的效果与样品浓度和使用频率有关。使用时注意降温，防止过热。唯窜烃姨曰橇涨鸿倦页流晶咬石橇犊必矿推湘瘫娶段绦抽臼抨娘踏限姐幼猪胰脏制备猪胰脏制备3)压榨法这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa～2000×105Pa的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放