《菌株的选育》ppt课件

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1、第三节抗噬菌体菌株的选育（一）噬菌体的分布广泛存在于土壤、肥料、粪便和污水中。有寄主细胞的地方，易找到其噬菌体。病人外科疮口脓液：金黄色葡萄球菌噬菌体；受细菌病害植株细菌发酵工厂污水和土壤（情况严重时，甚至从空气中亦能分离到噬菌体）。（1）抗噬菌体菌株选育方法a自然突变以噬菌体为筛子，敏感菌株孢子自然突变为抗性菌株（抗性突变频率低）。（二）抗噬菌体菌株的选育b诱发突变诱变处理过的敏感菌株孢子液分离在高浓度噬菌体平板上，长出的菌落为抗性变异株；生长速度一般与正常菌落相近。诱变后敏感菌孢子接入种子培养基，菌丝

2、长浓后加入高浓度噬菌体再培养几天，加入噬菌体反复感染，敏感菌裂解，平板分离抗性株。（2）抗噬菌体菌株的特性试验a抗噬菌体性状稳定性试验抗性菌株分别在孢子培养、种子培养和发酵培养过程中用点滴法或双层琼脂法测定噬菌斑。如都不出现噬菌斑，说明该菌株对此噬菌体具有抗性。还可观察抗性菌株经多次传代后对噬菌体的抗性是否稳定。b抗性菌株产量试验抗噬菌体菌株生产能力不低于原敏感株。一般抗性菌株与原敏感菌株在某些发酵特性方面会有些改变。因此，要考察它对碳源、氮源、通气量、无机磷添加量及其他培养条件的要求等。c抗性与溶源性的

3、区别试验菌株的抗噬菌体特性具有相对遗传稳定性抗性机理：改变细胞壁结构阻止噬菌体吸附侵入，改变生理代谢使噬菌体不能侵染，即使侵染后也不能增殖释放，这些菌株具有真正的抗性。溶源性菌株不是真正抗性菌（原噬菌体）？？（三）噬菌体的防治感染噬菌体后的表观现象：畸形菌丝，菌体迅速消失，pH值上升，发酵产物停止积累，甚至下降等现象。链霉素、红霉素、万古霉素、金霉素、林可霉素、谷氨酸、丙酮丁醇、山梨糖、碱性蛋白酶发酵过程中都会遭到噬菌体侵染。（1）正确判断根据发酵中出现的异常现象。（2）普及有关噬菌体知识（3）选育抗噬菌

4、体菌株（4）消灭噬菌体在感染噬菌体的发酵罐排气口及下水道喷洒药剂，防止噬菌体扩散。车间内外定期喷洒药物。常用药物有漂白粉、甲醛、石灰水等。种子室尽量与外界减少接触，严格执行无菌操作，检查空气中有无噬菌体存在。在噬菌体感染期间，车间内定时检查噬菌体分布情况，采取有效措施直至消灭为止。（5）收集和保存噬菌体将生产上出现噬菌体收集保藏起来用作选育抗性菌株及研究防治措施的材料和依据。噬菌体以预防为主，筛选抗性菌株，保持环境卫生，杜绝噬菌体滋生。第四节杂交育种概念：将两个基因型不同的菌株接合使遗传物质重新组合，从中

5、分离和筛选具有新性状的菌株。杂交育种目的：①不同菌株的遗传物质进行交换和重组，获得杂种菌株；②不同菌株的优良性能集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的菌株生活能力下降等缺陷；③通过杂交扩大变异范围，改变产品质量和产量，甚至出现新品种；④分析杂交结果，总结遗传物质转移和传递规律，促进遗传学理论的发展。互补的两种营养缺陷型菌株的混合培养中将会有不再需要两种物质的重组子出现。据此，1946年第一次在大肠杆菌中发现杂交行为。（一）细菌杂交细菌存在杂交行为的实验证明：实验证明，把上述两种菌株分别接种到一个特制的

6、U形管的两端培养，中间放一片烧结玻璃，培养液可流通但把细菌隔开，MM上不会出现菌落，说明细胞接触是基因重组的必要条件。细菌可通过F因子转移、转化和转导等发生基因重组（杂交）。细胞接触是基因重组的必要条件放线菌杂交是在细菌杂交基础上发展起来的。基因重组过程近似细菌，育种方法有许多与霉菌相似。（二）放线菌杂交育种放线菌只有一条环状染色体，基因重组过程类似于大肠杆菌，大体上有以下四种遗传体系。1、放线菌杂交原理混合培养营养缺陷型，菌丝间接触、融合形成异核体。异核体：在同一个细胞质里，存在两种遗传上不同的细胞核，

7、在营养上互补。菌落表型是原养型。基因型分别与亲本之一相同，无重组体出现。没有发生遗传信息交换。（1）异核现象接合：异核细胞内不同基因型的细胞核在双方增殖过程中，发生部分染色体转移或遗传信息交换。接合导致部分合子形成。（2）接合现象部分合子：是由一个供体染色体片段与一个受体染色体的整体相结合而形成的，但亦可能两个亲本都不完整部分合子形成后，经过一次单交换，产生的杂合的染色体组，即：异核系。异核系的菌落很小，遗传类型各不相同。能在MM或SM上生长。但异核系的分生孢子影印到同样培养基上就不能生长。（3）异核系的

8、形成异核系不稳定，在菌落生长过程中，染色体重叠两节段（二体区）的不同位置上发生交换后，能产生重组体孢子。异核系所产生的孢子几乎全部是单倍体，而成为一个单倍的无性繁殖系。但是，重组体也可由部分合子经过双交换而产生。（4）重组体的形成常用放线菌杂交方法：2、放线菌杂交技术混合培养法平板杂交法玻璃纸转移法选择性平板法两亲株是互补营养缺陷型，两亲株混合，接种到CM斜面上(其中一株产生孢慢时可多接一些)，孢子形成后制成单孢子悬浮液，然后