工程菌株选育

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1、工程菌株选育名词解释：1.菌株分离：是将一个混杂各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准备、有效的方法对它们进行分离、筛选、进而得到所需要微生物的过程。2.诱变剂：凡能诱发生物基因突变并且突变频率远远超过自发突变率的物理因子或化学物质称为诱变剂。3.物理诱变剂：是指通常使用物理辐射中的各种射线。4.化学诱变剂：是一类能对DNA起作用，改变其结构，并引起遗传变异的化学物质。5.碱基类似物：是一类和天然的嘧啶嘌呤等四种碱基分子结构相似的物质，是一种即能正突变，也能诱发回复突变的诱变剂。6.烷化剂：是

2、具有一个或多个活性烷基，它们易取代DNA分子中活泼的H原子，从而改变DNA分子结构，引起突变。7.营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长，称为营养缺陷型。8.烈性噬菌体：如果能在短时间内连续完成生活史的五个阶段而实现繁殖和裂解寄主的噬菌体称为烈性噬菌体。9.酶的合成调节：酶的合成调节是一种通过调节酶的合成量进而调节代谢速度的调节机制，这是一种在基因水平上的代谢调节。10.微生物的分解代谢阻遏现象：在初级代谢和次级代谢中都存在，其含义是指代谢过程中酶合成往往

3、受高浓度的易被迅速分解利用的碳源和氮源抑制。11.原生质体育种：以微生物原生质体为材料的常用育种方法有原生质体再生育种、原生质体诱变育种、原生质体转化育种和原生质体融合育种。12.原生质体再生育种：是微生物制备原生质体直接再生，从再生菌落中努力筛选变异菌株，最终得到优良性状提高的正突变菌株。13.原生质体诱变育种：它是以微生物原生质体为育种材料，采用物理或化学诱变剂处理，然后分离到再生培养基中再生，并从再生培养基中筛选高产突变菌株。14.原生质体融合育种：是指双亲本原生质体在促溶剂作用下相互作用，融合成一个细胞，然后核融合，最终

4、强制性的将双亲基因组融合，DNA交换重组并产生性状。15.基因组改组：基因组改组是传统育种方式与改组相结合，从而产生复杂子组合，快速选育微生物的方法。16.基因工程育种：广义：包括所有利用DNA重组技术将外源基因导入到微生物细胞，使后者获得前者的某些优良性状或者利用后者作为表达场所来产生目的产物物。狭义：仅指那些以微生物本身为出发菌株，利用基因工程方法进行改造而获得的工程菌，或者是将微生物甲的某种基因导入到微生物乙中，使后者具有前者的某些性状或表达前者的基因产物而获得新菌株。17.载体：载体是携带目的基因并将其转移至受体细胞内复

5、制和表达的运载工具。简答题：1.辐射剂量：绝对剂量：单位用crg1/nm2表示，常用一种计量仪测定。相对剂量：单位用照射时间或杀菌率表示。2.紫外线诱变的特点：1）方便，诱变效果很好的常用诱变剂2）在红光操作或暗培养3）参数：紫外功率，工作距离，照射时间3.辐射的照射方法：1）直接对平皿上的菌落进行照射2）用直径6--10mm的打孔器把菌落连琼脂一同取出，置于灭菌平皿内进行培养3）制成菌悬液4.碱基类似物诱变处理方法：1）单独处理：饥饿培养8--10h，浓度为25--40μg/ml，不同的菌浓度不同2）与辐射线复合处理：诱变后的

6、效果比单独处理的效果好。5.烷化剂的分类：1）单功能烷化剂：仅一个烷化基团，对生物毒性小，诱变效应大。2）双功能烷化剂或多功能烷化剂：具有两个或多个烷化基团，毒性大，致死率高，诱变效应较差6.烷化剂的性质：1）1--甲基--3--硝基--1--亚硝基胍（亚硝基胍、NTG或NG或MNNG）（1）黄色结晶状物质，性质不稳定，遇光颜色由黄色变为绿色，诱变效应降低，须保存在棕色瓶中，并在低温，干燥条件下保存。（2）NTG不溶于水，须加助溶剂（如丙酮），使用时现用现配，有起诱变剂之称。2）甲基磺酸乙酯（EMS）3）硫酸二乙脂（DES）4）

7、乙烯亚胺7.NTG诱变方法：孢子悬液的制备NTG母液制备混合终止反应处理完毕后，马上把接触过的NTG的器皿用NaOH和Na2S2O3侵泡处理。8.诱变育种的作用：提高有效产物的产量改善菌种特性提高产品质量简化工艺条件开发新品种9.影响菌种生长发育的主要因素：培养基斜面培养基制备技术移种的密度温度湿度药品和材料质量10.诱变育种的步骤：一。出发菌株的纯化二。单孢子悬液的制备三。诱变剂及诱变剂量四。突变株的常规分离与筛选五。诱变剂的处理方式11.诱变剂的处理方式1）两个以上因子同时处理2）不同诱变剂交替处理3）同一种诱变剂连续重复使

8、用4）紫外线光复活交替处理12.突变株的筛选方法（一）随机突变：也称摇瓶筛选，主要是随机挑选的平板菌落进行摇瓶筛选。（二）平板菌落预算：1）根据形态筛选突变株2）根据平板菌落生化反应突变株3）采用冷敏感菌筛选抗生素变株4）浓度梯度法5）琼脂块大通量筛选突变株6）