经典液相色谱法(I)

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1、第十八章经典液相色谱法第一节概述经典液相色谱法：采用普通规格的固定相，常压输送流动相的液相色谱法称～。缺点：固定相颗粒较大且不均匀常压下输送流动相离线检测、分析周期长优点：仪器设备简单，费用低对样品预处理要求不高可同时分析多个样品分类：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法等柱色谱法、平面色谱法应用：产品纯度控制、杂质检查、天然药物有效成分分离、中药定性鉴别等第二节液-固吸附柱色谱（如M.Tsweet法）（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）色谱条件的选择（一）分离原理各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活

2、性中心利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质1.硅胶2.氧化铝3.聚酰胺吸附能力大小取决于吸附中心的多少和吸附中心与被吸附组分形成氢键能力的大小1.硅胶（SiO2·H2O）结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心表面硅醇基存在形式：游离羟基Ⅰ吸附特性1：易吸水→失活→105～110℃烘干0.5~1h(可逆失水)→吸附力最大活化（P469）：铺好的硅胶板自然晾干后，在烘箱中于105～110℃烘干0.5~1h

3、的过程→500℃烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力表18-1硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小活性≠活性级吸附能力吸水量8/4/2021硅胶吸附特性2：与极性物质形成氢键物质极性↑，吸附能力↑，k↑，tR↑适用：分析酸性或中性物质2.氧化铝碱性氧化铝pH9～10适于分析碱性、中性物质中性氧化铝pH＞7.5适于分析酸性碱性和中性物质酸性氧化铝pH4～5适于分析酸性、中性物质3.聚酰胺氢键作用氢键能力↑强，组分越后出柱（三）色谱条件的选择：1.被测组分性质（

4、极性大小）：烃＜--------＜羧酸，醇判断物质极性大小的规律：①基本母核相同，分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强②分子中双键越多，吸附能力越增，共轭双键多吸附力亦增大③化合物基团的空间排列对吸附性也有影响。如能形成分子内氢键的要比不能形成分子内氢键的相应化合物的极性要弱，吸附能力也弱色谱条件的选择依据被测组分、吸附剂和流动相的性质——极性2.吸附剂的活性：吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强强极性物质——选择弱吸附剂弱极性物质——选择强吸附剂3.流动相的极性：流动相极性↑大，对被测组

5、分的洗脱能力↑大“相似相溶”原则：根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相常用的流动相极性递增的次序是：石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯＜乙醚＜氯仿＜醋酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。续前续前4.三者关系图示：组分吸附剂流动相极性活性小极性非(弱)极性活性大非极性或弱极性第三节　平面色谱法的分类和参数分类薄层色谱法TLC：吸附薄层色谱法分配薄层色谱法纸色谱法PC:分配色谱法平面色谱参数定性参数——比移值Rf相平衡参数——K、k分离参数——分离度R1、定性参数比移值(Rf值)溶质移动距离

6、与展开剂移动距离之比Rf=L/L0（定时展开）L为原点（origin）至斑点中心（质量重心）的距离L0为原点至溶剂前沿（solventfront）的距离——类似保留时间（定距展开）与组分及色谱条件有关2、相平衡参数分配系数K=Cs/Cm容量因子k=CsVs/CmVmK、k与Rf值的关系：讨论Rf与K有关，即与组分性质（极性）以及吸附剂和展开剂的性质有关；色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为续前1）K↑大，Rf↓小2）薄层板一定，对于极性组分展开剂极性↑大，

7、Rf↑大（容易洗脱）展开剂极性↓小，Rf↓小（不容易洗脱）3）Rf范围：0

8、一）概述（二）吸附剂的选择（三）展开剂的选择（四）薄层板的制备（五）定性与定量分析（一）概述1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法2．操作过程：见图示铺板→活化→点样→展开→定位(定性)/洗脱(定量)3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻）4．特点：分析快速、灵敏、显色方便5．应用：药物杂质检查、纯度测定next（二）吸附剂的选择根据被测物极性和吸附剂的吸附能力被测物极性强——弱极性吸附剂被测物极性弱—