5 高效液相色谱法和荧光偏振免疫法测定甲氨蝶呤血药浓度的相关性

《5 高效液相色谱法和荧光偏振免疫法测定甲氨蝶呤血药浓度的相关性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、262深圳中西医结合杂志第4期〔文章编号〕1007-0893(2003)-04-0262-02高效液相色谱法和荧光偏振免疫法X测定甲氨蝶呤血药浓度的相关性1123钱文　　薛国菊　周凤珍　王正容1　深圳市第二人民医院药剂科(广东深圳518035)2　深圳市第二人民医院妇产科(广东深圳518035)3　深圳市福田区妇幼保健院药剂科(广东深圳518026)〔摘　要〕目的　比较两种甲氨蝶呤血药浓度测定方法的相关性。方法分别采用高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免疫法(FPIA)测定。结果两方法测定值的回归方程为CFPIA=0.8733CHPLC+0.1001,2r=0.98

2、1(P<0.05)。结论两方法相关性好。FPIA法灵敏度更高,且操作简便。〔关键词〕高效液相色谱法;荧光偏振免疫法;甲氨蝶呤〔中图分类号〕R392-33〔文献标识码〕A　　甲氨蝶呤(MTX)单次肌肉注射用于异位妊娠保析纯,水为重蒸馏水,空白人血浆由深圳市血站提供。〔1〕守治疗已在临床应用多年,治疗成功率高。但甲氨2　方法与结果蝶呤作为一个细胞毒性药物,即使使用剂量低,毒副2.1HPLC法〔2,3〕反应发生率仍在24%～30%,包括骨髓抑制、血2.1.1　色谱条件　流动相:甲醇:0.025mol/L小板减少、严重的白细胞降低、恶心、呕吐、腹泻、溃疡磷酸盐缓冲液(pH6.

3、7)=25:75,紫外检测波长性胃炎、出血性肠炎、光过敏、肝细胞坏死等。因此治303nm,流速1.2ml/min,柱温25℃,样品温度25℃。疗过程中的药物浓度监测很有必要。笔者研究高效2.1.2　标准溶液的配制　精密称取MTX对照液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免疫法(FPIA)分别测品4.54mg,加甲醇溶解,定容于10ml量瓶中,得浓度-1定MTX血药浓度的相关性。1000μmol·L储备液,取此液1.0ml置100ml量瓶中,L-11　仪器与试药加甲醇至刻度,得浓度为10μmol·稀释液。高效液相色谱仪(美国Waters公司Alliance26952.1.3　

4、血样处理方法　血浆样品0.5ml,加32型,2487检测器,Millennium色谱管理系统);C18柱10%高氯酸100μl,旋涡混合30s,4000r/min离心R(WatersSpherisorb5μmODS2,4.6mm×250mm);快15min。吸取上层清液400μl,加入氯仿600μl,旋涡混速血药浓度测定仪(TDx仪)及MTX试剂盒(美国合1min,12000r/min,离心15min,取上层清液50μlAbbottLaboratories);德国SartoriusBP211D型电子分进样。析天平。2.1.4　血浆标准曲线　在空白人血浆样品中,甲氨蝶呤

5、对照品(购自中国药品生物制品检定分别准确加入一系列MTX稀释液,旋涡混匀,得浓度-1所),甲醇(Merck公司,色谱纯),其余化学试剂均为分分别为0.1,0.25,0.50,0.75,1.0,2.0μmol·L的样X〔收稿日期〕　2003-06-28〔项目基金〕　2002年度深圳市科学技术局立项课题(200204066)〔作者简介〕　钱文　(1971—),女,重庆市人,主管药师,主要从事药检及体内药物分析。第13卷第4期深圳中西医结合杂志Vol.13.No.42003年8月SHENZHENJOURNALOFINTEGRATEDTRADITIONALCHINESEAND

6、WESTERNMEDICINEAugust2003263品,按2.1.3方法处理后进样,外标法定量,MTX在2.2FPIA法-10.1～2.0μmol·L范围内,浓度(C)和峰面积(A)线2.2.1　操作方法　血浆样品加入样品池置样品性关系良好,r=0.9998。转盘中,MTX试剂盒置机器内,按TDx仪操作指南进在此色谱条件下,血浆杂质对MTX无干扰,MTX行,则TDx仪自动依次定量加入稀释剂、荧光标记物、保留时间约8.6min。患者血浆样品经同法处理,特异抗体等试剂,温孵约3min,计算机通过标准曲线MTX峰与内源性杂质及代谢产物分离良好。拟合,将荧光偏振值换算得到

7、相应的浓度值,自动打2.1.5　方法精密度　分别配制低、中、高三种浓印结果。度(0.25,0.75,1.5μmol·L-1)的血浆标准品,依2.2.2　血浆标准品　取2.1.4中各浓度血浆样2.1.3方法处理后进样,日内连续测定3次,周内重复品,旋涡混匀后,分别吸取100μl,依法操作,其中1.0,-1测定3次,依标准曲线方程计算,求得方法的日内误2.0μmol·L两点,需做1:10倍稀释。差(RSD)分别为3.21%,2.08%,2.52%,日间误差2.3　数据处理　对HPLC法和FPIA法测定结(RSD)分别为4.37%,2.10%,3.98%。