植物组织培养与花药培养

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1、植物组织培养与花药培养北京教育学院靳飞一、理论背景◎植物克隆——体细胞发育为完整植株◎理论背景——细胞全能性◎知识迁移——无性繁殖石莲花燕子掌橡皮树二、应用及发展（一）快速繁殖（二）植株脱毒1、花卉、药材的批量生产；2、濒危植物的保藏；（三）遗传育种摆脱了种子生长条件的限制传代培养与生长的速度大于病毒侵染的速度1、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征；2、通过花药培养活得纯合品系（DH群体）；（四）研究方向1、非被子植物的组织培养；2、珍稀植物的组织培养；DH群体：双单倍体（DoubleHyploid）杂交育种红花自交AaAAAa

2、aa自交取性状不分离者花药培养花药培养自然加倍AAaaAa红花白花DH群体三、操作步骤（一）胡萝卜的组织培养1、药品与耗材（1）药品：MS培养基；2,4-D；6-BA；95％酒精；医用酒精；次氯酸钠；蒸馏水；（2）耗材：解剖刀；培养皿；滤纸；烧杯；广口瓶；封口膜；镊子；棉球；橡皮筋；酒精灯；2、准备工作（1）超净台的消毒（2）点燃酒精灯——酒精棉擦拭双手3、操作步骤（1）取材取胡萝卜根（长度为15－20cm），两端各弃去3cm；将胡萝卜切成3～5mm厚的圆片；切去圆片的边缘，使材料形成一2x2～4x4cm的正方形；沿正方形两条对称轴

3、切开，呈1x1～2x2cm的四等份；将切好的材料浸泡在无菌水中，备用；（2）消毒用镊子夹取组织块于10％的NaClO溶液中，静置10min；用无菌水漂洗材料1min，之后置于75％酒精中，静置5min；用无菌水漂洗材料1min，备用；（3）接种用镊子夹取组织块，放入培养基中，轻按压。每瓶培养基放置3个组织块；用封口膜封好瓶口；①②③④⑤①②③①②（二）百合的花药培养1、药品与耗材（1）药品：MS培养基；2,4-D；6-BA；95％酒精；医用酒精；蒸馏水；（2）耗材：解剖刀；剪刀；培养皿；滤纸；烧杯；广口瓶；封口膜；镊子；棉球；橡皮筋

4、；酒精灯；2、准备工作（1）超净台的消毒（3）点燃酒精灯——酒精棉擦拭双手（2）花苞的剪取3、操作步骤（1）取材取为开放的百合花苞，剪去花托以下部分；（2）消毒用酒精棉球擦拭花苞外表。待酒精挥发后反复擦拭，共3次；（3）接种剥开花瓣，用镊子摘取花药，放入培养基中，轻按压。每瓶培养基放置2～3枚花药；用封口膜封好瓶口；②①四、注意事项（一）培养基的配制1、母液的分类大量元素大量-1大量-2大量-3硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾；氯化钙；硫酸镁；微量元素微量-1微量-2微量-3硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜；硼酸、钼酸钠、氯化钴；碘化钾；铁盐EDT

5、A-钠、硫酸亚铁；有机附加物甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇；干物质蔗糖、琼脂；激素2,4-D、NAA、6-BA；2、配制方法说明（1）母液分类的依据：避免产生沉淀（2）特殊溶剂的使用①生长素类物质（例：1mg/ml2,4-D母液，10ml）＃称取0.01g2,4-D固体，置于小烧杯中；＃用1～3ml95％乙醇（或0.1mol/LNaOH）溶解；＃缓慢加入蒸馏水定容。即：每加入1ml蒸馏水，立即搅拌均匀，使白色沉淀消失。重复数次，直至定容，常温避光；②6-BA：用0.1mol/L的HCl助溶，方法同上。（3）危险药品①硝酸铵、硝酸钾：易爆

6、物品；②EDTA-钠、氯化钴、2,4-D：致癌物；（4）热水定容加入琼脂、熔化后，要用热水定容，防止形成琼脂块固体，影响浓度；（二）操作须知2、准备工作（1）紫外灯消毒15min：除实验材料外，一切耗材、药品置于超净台内，打开紫外灯，消毒15min；（2）关闭紫外灯，打开风机、日光灯，点燃酒精灯；（3）用酒精棉球擦拭手和台面，开始工作。1、超净台内必备物品（1）废液缸：取1000ml烧杯，加入200ml水，置于超镜台的右前方；（3）酒精灯、火柴及酒精棉球。；（2）组培器械：将解剖刀、手术剪、镊子及一500ml烧杯灭菌，放入超镜台。烧

7、杯中倒入300ml75％酒精，将上述组培器械浸泡于其中；3、安全须知（1）酒精灯的使用；（2）防火常识；