高效液相色谱法测定蒙药色布如棍钦德吉德含量

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1、高效液相色谱法测定蒙药“色布如棍钦德吉德”含量赤峰市药品检验所024000倪燕君摘要建立了蒙药“色布如棍钦德吉德”含量的反相高效液相色谱法。采用ODS-C18柱，流动相为甲醇-水（70：30），流速为1.0ml/min，检测波长为343nm。线性范围为0.10156µg～1.0156µg,r=0.9998,平均回收率为102.2%，RSD为0.7%。关键词蒙药高效液相色谱法胡椒碱荜茇药材白胡椒药材蒙药“色布如棍钦德吉德”属散寒、温胃、下气药，临床主治胃寒、脘腹冷痛、呕吐等，主要成分为荜茇、白胡椒等二十一味中药。运用高效液相色谱法对本品中

2、的荜茇、白胡椒建立含量测定方法。通过实验摸索，确定了比较理想的色谱条件，并经过方法学考察及阴性对照实验，表明该方法操作简单，重现性好，专属性强，方中其它组分对胡椒碱的测定无干扰，1.仪器与试药岛津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp型检测器,shimadzuclass-vp色谱工作站，TU-2450型可见-紫外分光光度计。胡椒碱对照品（批号：0775-200203）：中国药品生物制品检定所；蒙药“色布如棍钦德吉德”（批号：2006051、2006069、2006089）：内蒙古阿拉善盟蒙医医院；阴性对照样自配；甲醇为色谱纯，水为超纯

3、水，其它试剂均为分析纯。2.方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilR(钻石)-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5µm）；流动相甲醇-水（70：30）；流速为1.0ml/min，检测波长为343nm。2.2溶液配制对照品溶液精密称取胡椒碱对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含胡椒碱1mg的溶液作为对照品溶液。供试品溶液取本品约1.61g，精密称定，置100ml容量瓶中，加无水乙醇约80ml，超声处理（功率250W,20KHz）30分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，离心，精密吸取上清液10ml,置25ml容量瓶中，加无水乙

4、醇至刻度，摇匀，溶液经0.45µm滤膜滤过,即得。阴性对照溶液按照处方取除白胡椒、荜茇以外的其它药材适量，精密称定，以下按供试品溶液配置方法同法配制。2.3专属性取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液进样，测得结果为：阴性对照色谱图中在与胡椒碱对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对胡椒碱的测定无干扰（见图1）。a.阴性对照b.胡椒碱对照品c.色布如棍钦德吉德图1.典型HPLC图2.4线性试验取胡椒碱对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加无水乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.25、0.5、

5、1.0、1.5、2.0、2.5ml溶液分别置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，溶液经0.45µm滤膜滤过，进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果胡椒碱在0.10156µg～1.0156µg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=6690331X-34109r=0.99982.5稳定性和精密度取同一份供试品溶液（2006051），分别于0h、2h、4h、8h、16h进样，测得含量的RSD为0.1%，表明供试品溶液在16小时内稳定。取同一份供试品溶液（2006069）连续进样6次，测得含量的RSD为0.4%。取同一

6、批号（批号2006089）供试品5份，按“2.2”项下制成供试品溶液，进样，测得含量的RSD为0.6%。2.7回收率取3个不同量的供试品（批号2006051）各3份，各约0.66g、0.81g、0.98g，精密称定，按1：1的比例，各精密加入胡椒碱对照品溶液适量，分别按“2.2”项下方法制成供试品溶液，进样，测得平均回收率为102.2%，RSD为0.7%。3．样品测定分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定，按外标法以峰面积计算得胡椒碱含量，结果见表1。表1样品中胡椒碱含量测定结果批号含量（mg/g）20060515.420060695.4

7、20060895.44．讨论流动相的选择：参照文献[1]，用甲醇-水为流动相进行流动相条件摸索，通过不同比例的比较，当流动相的比例为（70：30）时，样品中的胡椒碱与其它成分达到较好的分离度，并具有较合适的保留时间。检测波长的选择：取胡椒碱对照品溶液，于紫外-可见分光光度仪上，自200nm～700nm做光谱扫描，结果胡椒碱在波长340nm处有最大吸收，结合文献[1]选用343nm作为检测波长。提取溶剂的选择：胡椒碱易溶于无水乙醇，故选择无水乙醇作为提取溶剂。提取效率的考察：以无水乙醇作为提取溶剂进行超声提取，实验中考察了超声10分钟、2

8、0分钟、30分钟、40分钟、50分钟等不同提取时间对提取效率的影响，测定结果表明，超声处理30分钟后供试品中胡椒碱的含量基本不变，故将提取时间定为超声处理30分钟。参考文献[1]《中国药典》2005年版一部