Tan第二章基因工程的工具酶PPT课件

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1、本课程内容第一章绪论第二章基因克隆的工具酶第三章基因工程的载体第四章目的基因的制备第五章目的基因导入和重组子的筛选第六章外源基因的表达第七章基因操作的基本技术第八章植物基因工程及应用第九章动物基因工程及应用第十章医学基因工程及应用9/15/20211欢迎同学们听课！第二章基因工程的工具酶2.1核酸酶2.2甲基化酶2.3连接酶2.4聚合酶2.5修饰酶9/15/20212欢迎同学们听课！2.1核酸酶限制性核酸内切酶2.1.1限制性核酸内切酶的类型2.1.2限制性核酸内切酶的命名法2.1.3限制性内切酶的识别序列

2、2.1.4限制性内切酶的切割位点2.1.5限制性内切酶的切割方式2.1.6限制性核酸内切酶的反应体系2.1.7限制性核酸内切酶的星活性2.1.8限制性核酸内切酶对DNA的消化作用2.1.9限制性核酸内切酶酶切注意事项9/15/20213欢迎同学们听课！几乎所有的生物都能合成自身所需要的酶，包括许多病毒。酶参与所有生命活动过程，其在细胞内的分布、含量、活性等随生物生长、发育及外界条件的改变而改变。Ribozyme：具有催化能力的RNA。酶不都是蛋白质。定义：由活细胞产生，能在体外和体内起同样催化的一类具有特殊空

3、间结构的生物大分子，包括蛋白质和核酸等。9/15/20214欢迎同学们听课！限制性内切酶（Endonucleosase）的发现50年代初发现细菌能将外来DNA片段在某些专一位点上切断，从而保证其不为外来噬菌体所感染，而其自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护，这种现象叫做限制－修饰，它们由三个基因位点所控制：hsdR,hsdM,hsdS,十年后，人们搞清了细菌的限制与修饰分子机理：　　hsdR---限制性内切酶　　hsdM---限制性甲基化酶　　hsdS---控制两个系统的表达9/15/2

4、0215欢迎同学们听课！1968年Smith等人从流感嗜血杆菌株中分离出两个类内切酶，HindII和HindIII，为基因工程技术的诞生奠定了基础。截止到目前为止，已经分离出400余种II类酶，搞清识别位点的有300种，商品化的约有100种，而实验室常用的有20种。9/15/20216欢迎同学们听课！III类：识别位点严格专一（不是回文序列），但切点不专一，往往不在识别位点内部。2个亚基组成：HsdM－甲基化HsdR－限制性内切酶功能需要ATP、Mg2+，类似于I应用同样受限制。9/15/20219欢迎同学

5、们听课！II类：识别位点（回文序列）严格专一，并在识别位点内将双链切断。因此在基因工程中具有实用价值的是II类限制性内切酶。应用最广，酶最简单(Mg2+)，不需要特殊条件具有两个亚基：HsdM－甲基化HsdR－限制性内切酶功能切割特异9/15/202110欢迎同学们听课！2.1.2限制性核酸内切酶的命名法用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的3个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株（型）的代号命名。该菌株（种）中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号I,II,III等。如：Escherichiacoli用

6、Eco表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名，若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。例：HindIII从流感嗜血菌株（HaemophilusInfluenzue）d株中分离的第三个酶。EcoRI表示基因位于Escherichiacoli中的抗药性R质粒上。9/15/202111欢迎同学们听课！derivation：firstthreenamesfromthelatinnamesofthemicroorganismthatproducesthem.firstletter(genus),nexttw

7、oletters(species)writing：前三个字母用斜体，其他用正体表示。如果酶存在于一种特殊菌株中，三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字,表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。9/15/202112欢迎同学们听课！2.1.3限制性内切酶的识别序列识别序列指限制性内切酶在双链DNA上能够识别的特殊核苷酸序列专一通常4～6个特定的核苷酸对组成迴文结构(palindromicsequence)或旋转对称或二重互补对称9/15/202113欢迎同学们听课！recognitionseq

8、uence:cleaveDNAsymmetricallyinbothstrandsatshortpalindromic(symmetrical)recognitionsequencestoleavea5’-phosphateanda3’-OH.Theyleavebluntends,orprotruding5’-or3’-termini.EcoRⅠ:↓*5＇GAATTC3＇3＇CTTAAG5＇*↑9/