《动物寄生虫病学》许金俊-实验十动物原虫病的实验室常规诊断

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1、实验十动物原虫病的实验室常规诊断一、实验目的和要求通过实习，学握动物血液中寄生原虫、肠道内寄生原虫和组织寄生原虫的实验室常规诊断的方法及步骤,了解生殖道寄生原虫的实验室常规诊断的方法及步骤，了解利用动物接种试验诊断原虫病的方法。二、实验材料可疑动物的血液、生殖道分泌物、肠道内容物及组织，各种染色液配制，动物接种用实验动物，具体见和应的实验内容及操作部分。三、实验内容及操作步骤（带*为学生自己操作内容，其余为指导教师进行示教内容）（―）血液内原虫的检査•-般用消毒的针头自耳静脉或颈静脉采取血液。此法适用于检查寄

2、生于血液中的伊氏锥虫和住白细胞虫及梨形虫等。1、鲜血压滴标本检査将采出的血液滴在洁净的载玻片上，加等最的生理盐水混合，覆以盖玻片，立即用低倍镜检查，发现有运动的可能虫体时，可再换高倍镜检查，由于虫体未染色，检查时应使视野中的光线弱些。此法适用于伊氏锥虫和附红细胞小体。2、涂片染色检査法采血滴于载玻片Z—端。按常规推制成血片，并使晾干，滴于甲醇2—3滴于血膜上，使其固定，尔后用姬氏或瑞氏液染色，染色后用油镜检查。本法适用于各种血液原虫。（1）姬氏染色法［染色液的配制］①原液姬氏染色粉0.5g+无水甘油（中性）2

3、5ml+无水甲醇（中性）25ml加少量tt油研解，均匀后加入全部卄油，50〜60°C的水浴锅中约2h,并摇动，完全溶解，装入棕色试剂瓶屮，散好放置2.3周后过滤。即为原液。②缓冲液和缓冲蒸馆水为了保证所染的血膜结果良好，必须用缓冲液和缓冲蒸馆水。甲液：磷酸氢二钠（无水）9.lg+蒸馆水1000ml乙液：磷酸二氢钾（无水）9.07g+蒸锚水1000ml缓冲蒸锚水：稀释染液和冲洗血膜所用的蒸馆水，以PH7.0〜7.2最为适宜。每次应用时宜新鲜配置。甲:63ml+乙：37ml+900ml水（PH7.0）,或甲:73

4、ml+乙：27ml+水900ml（PH7.2）.［染色法］1份原液+10〜20份缓冲蒸馆水〜染液一染色30minf缓冲蒸锚水轻轻冲洗载玻片上的染液〜等干后〜高倍镜或汕镜检查。［结果］锥虫：细胞原液浅蓝色，生核呈紫色或深红色，动基体呈紫色或红色。梨形虫：细胞质呈蓝色，核的染色质呈紫红色。次他：红细胞呈浅红色，嗜酸性白细胞的颗粒呈红色，淋巴细胞呈蓝色，各种白细胞的核和嗜碱性白细胞的颗粒呈蓝紫色。（2）瑞氏染色法［染色液配置］瑞氏试剂粉0.1〜O..5g+（中性）甘油3ml+甲醇97ml,放入甘油后研磨,加入甲醇,

5、充分摇匀，隔24h后即过滤应用。一般1〜2周后再过滤应用。［染色法］（血片不需预先固定）。血膜上加数滴染液〜2min（相当于固定）后一等量中性蒸馅水,混匀，3〜5min（染色）一清水轻轻冲洗至血膜呈红色为止一待干后镜检。［结果］大体相同于姬氏染色。3、虫体的浓集法当血液屮的虫体较少时，用常规血片法不易查到虫体时，可用虫体浓集法。在离心管内加2%柠檬酸钠生理盐水3-4ml,加被检血液6-7ml,充分'混匀，先以每分钟500转速离心5min,弃上清血淸，然后将含有虫体、白细胞和少量红细胞的上层血浆，用吸管移入另一

6、离心管内，加适量的生理盐水，再以2500转/分离心lOmin,吸取沉淀物制成抹片，按上述方法染色镜检。此法适用于伊氏锥虫和梨形虫。(-)生殖道原虫的检查1、牛胎儿毛滴虫检查(1)病料采集：牛胎儿毛滴虫存在于病母牛的阴道和子宫的分泌物，流产胎儿的羊水，羊膜或第四胃内容物和公牛的包皮鞘内，应采取以上病料检查虫体。在检查虫体时以发现运动活泼的的虫体为准，实验时要注意一下几点：①应该尽量避免其他鞭毛虫混入样品而造成错误诊断。②虫体在低温时活动减弱，因此应该将冲洗液、载玻片等适当加温。③虫体较脆弱，冲洗液应采用无金属离

7、子的生理盐水。④病料采集后要尽快检查。母畜病斜的采集，可采取阴道分泌出的透明粘液，但为了减少污染，自阴道内采取粘液更为合适，可用一直径1厘米长度45厘米的玻管在距离一段12厘米处弯成150度角，消毒备用，使用时将短的一端插入阴道，另一端接一橡皮管，并抽取少量阴道粘液即可吸入管内，取出，两端塞以棉球，带回实验室检查。公畜包皮冲洗液的收集，应先准备100〜150毫升加温到30〜35&C的生理盐水，用针筒注入包皮腔，用手指捏住包皮的出口，用另一手按摩包皮后部，而后放松手指，将液体收集到广口瓶中待查。流产胎儿，可取其

8、第4胃内容，胸水，腹水检查。(2)检查法：将收集到的病料立即放在载玻片上，注意防止病料干燥。对粘稠的阴道粘液检查前以生理盐水稀释，2〜3倍，羊水或包皮洗涤物最好先离心沉淀，而后以沉淀物制片检查。未染色的标本主要检查活动的虫体，在显微镜下能见到长度略大于一般的白血球，能清晰看到波动膜，有时可以看到鞭毛和虫体内含有圆形或椭圆型折光性很强的核，波动膜的发现可以作为与其他一些非致病性的鞭毛虫和纤毛虫的区别。