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1、关于氨基酸的 定量分析03化学3班杨曦03081095氨基酸的分析方法化学分析法——甲醛滴定法甲醛滴定法用于氨基氮的测定,可以测出样品中总氨基酸的含量,其原理是在中性或弱碱性水溶液中,氨基酸的α—氨基与醛类反应生成Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚甲基亚氨基衍生物亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定,从而得到样品中总氨基酸的含量。但是，甲醛法准确度差,终点较难掌握。我们还学过凯氏定氮法，测定样品中总氮的含量。虽然准确度高,但操作步骤复杂,试剂耗量多,测定周期长。茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是经阳离子交换柱
2、分离出的氨基酸与茚三酮混合,经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测,检测波长分别为570nm和436nm。茚三酮分光光度法——茚三酮法(nin-hydrin):亮黄色化合物紫色化合物衍生反应溶液的pHpH5-pH6的弱酸性130℃茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达2×10-10～5×10-10mol/L,衍生物稳定性较好。衍生剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测但是，衍生反应条件要求较高,需附设加温衍生装置,仪器造价高并专一性强。分析时间长,分析成本高,工作效率低。羊毛水解液中
3、氨基酸含量的测定氨基酸总的含量可以用甲醛滴定法—NH2与甲醛结合,其碱性消失。这样就可以用碱来滴定—COOH基,并用间接的方法测定氨基酸的含量。不同种类的氨基酸需要用不同的方法来测定，例如：用三硝基苯磺酸法测定赖氨酸……L-胱氨酸含量的测定水解液—中和—沉淀过滤—粗品—酸溶—除Fe等杂质—脱色—中和—沉淀过滤—干燥—精制品。溴能将胱氨酸氧化成α-氨基-β-磺基-丙酸,过量的溴又将碘化钾中碘离子氧化成游离碘,用碘量法测定碘的量,从而可进行L-胱氨酸的间接测定。HO2S—CH2—CHNH2—COOH氢氧化钠溶液:10g/L,盐酸,碘化钾溶液:450
4、g/L,用时配制,溴液:C(Br2)=0.1mol/L,称取溴酸钾3g,溴化钾15g,加水溶解成1000mL,置于棕色瓶中保存，淀粉溶液:5g/L,新鲜配制,硫代硫酸钠标准滴定溶液:C(Na2S2O3)=0.1mol/L。KBrO3+5KBr+6HCl——3Br2+6KCl+3H2OS—CH2—CHNH2—COOH5Br2+︱+6H2OS—CH2—CHNH2—COOH——2HO2S—CH2—CHNH2—COOH+10HBrBr2+2KI——I2+2KBrI2+2Na2S2O3——2NaI+Na2S4O6称取干燥后的试样0.13g(精确至0.00
5、02g),加氢氧化钠溶液10mL移入100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。吸取该溶液25.0mL于碘量瓶中,加溴液50.00mL,加盐酸10mL,立即加盖,摇匀，于暗处放置10min再在冰浴中冷却3min以上,加碘化钾5mL,立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色,加入淀粉溶液2mL,继续滴定至蓝色消失为终点,同时做空白试验。V1———空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积/mL;V2———试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积/mL;C———硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度/mol/L;m———试样的质量/g;0.02403———与1.
6、00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液[C(Na2S2O3)=1.00mol/L相当的,以g表示的L-胱氨酸的质量
