纳豆激酶分离提纯方法中试研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第24卷第4期内蒙古农业大学学报Vd．242003年12月Dec．20o3JournalofInnerMongoliaAIculturalUniversity文章编号：1009—357512003)04—0o51—04纳豆激酶分离提纯方法中试研究李立民。。惠洪文。王明芳(1．内蒙古农业大学生物工程学院，呼和浩特010018；2．内蒙古满洲里市商检局；3．内蒙古呼和浩特市制药厂)摘要：本文在中试规模上对纳豆激酶(Nattokinase，NK；1种溶栓酶)发酵工程的下游主要工艺进行了研究。对纳豆枯草杆菌(}Ⅱ86)发酵液

2、中初步提取纳豆激酶(NK)进行了探讨。通过加入CaCI~和NaCO~对发酵液的前处理、离心过滤、超滤浓缩、离子交换层析等操作之后．得到了较纯的酶蛋白。整个过程．蛋白收率为17％，酶活性收率为61．74％。若再进行适当完善．本工艺则可以应用于大规模的针剂型纳豆溶栓酶的工业化生产。关键词：纳豆激酶；离心过滤；超滤浓缩；离子交换中图分类号：Q814．1文献标识码：ASTUDYONPURIFICATIONOFNATTOKINASEFROMTHEB．NATTOFERMENTEDBROTH(LIQUOR)LILi—min。HUIHong—wen2．WANGMing—lane(

3、1．CollegeofBioengineering．InnerMongoliaAgricultureUniversity．Huhhot010018．China；2．C[粕m0dityInspectionofficeofManilx~uli，InnerMongoliaManzhouliChina3．HuhhotPharmaceuticalfactory．InnerMongolia，HuhhotChina)Abstract：Aprimaryindustrializedpurificationmethodofnattokinasewasreported．Nattokin

4、asewaSextractedfromABacillussubtilisnattostrain(HL986)fermentedbroth(1iquor)accordingtofollowingprocess：ferment—ingliquorwerepretreatedwithCaCI2andYaCO~beforecentrifugation，andNKwaSisolatedfl姗thesupernatebysequentialuseofsuper—filter。ion—exchangechromatography，andgel—filtration．Theiso

5、latedproteingaveasinglebandonSDS—PAGE(M．W≈30kd)．Theproteinyieldwas17％，andNKactivityrecoveryrateWas61．7％．Keywords：nattokinase；purification；super—filter；ion—exchangechromatography；gel—filtration目前，全世界有血栓栓塞性病人约1500万．是严重威胁人类生命、身心健康的疾病之一。血栓栓塞性疾病主要有3种：1、冠状动脉疾病形成血栓，主要指急性心肌梗死；2、脑血管疾病形成血栓，即脑血栓

6、，中风；3、末梢动静脉疾病形成血栓，即脉管栓塞。血栓栓塞性病人体内的纤维蛋白原在凝血酶作用下生成纤维蛋白多肽A和纤维蛋白多肽B，两种纤维蛋白多肽转化成纤维蛋白单体(a，p，)：后自发聚合成不稳定的纤维作薯者是简羿介：李200立3民-器(1968一)，男，实验师，硬士．从事生物化学及分子生物学方面的研究冗维普资讯http://www.cqvip.com52内蒙古农业大学学报20o3年蛋白多聚体，不稳定的纤维蛋白多聚体在Ca2，Ⅷ因子的作用下交联成稳定的纤维蛋白多聚体，这就是血栓的主要基质。溶栓剂是治疗和预防血栓栓塞性疾病的重要药物，它主要通过激活纤维蛋白溶解酶原转化

7、成纤维蛋白溶解酶从而溶解血栓。纤维蛋白溶解酶还可以直接催化血栓的主要基质纤维蛋白水解。近l0年来，对溶栓剂的推广使用而使血栓栓塞性病人的病死率明显下降，溶栓剂的潜在市场约20亿美元，因此世界各国都致力于这方面的药物研究开发【4】。韩润林博士领导的开发课题组从1种日本纳豆中分离出1种枯草杆菌，命名为HL986，可产生高水平的溶栓酶。经过小试的严密试验，进一步进行到中试阶段。本文在中试规模上对纳豆激酶(Nattokinase，NK；1种溶栓酶M．W≈30kd)发酵工程的下游主要工艺进行了研究。1材料1．1发酵菌种枯草杆菌HL986(由中科院韩润林博士提供)。1．2主要

8、药品CM5