层析法分离纯化纳豆激酶-论文.pdf

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1、食品科技2O13年第38卷第O镛FOODSCIENCEANDTECH^IoLoGY提取掬与应用层析法分离纯=jl纳激酶徐慧，吴晖，尹志娜，赖富饶(华南理工大学轻工与食品学院，广州510640)摘要：通过对纳豆激酶分离纯化方法的研究，得出：纳豆激酶发酵液经离心、30％-70％硫酸铵分段盐析沉淀、SephadexG一50凝胶层析和QAE—SephadexA一50离子交换层析后，得到的酶液经SDS—PAGE电泳检验为单一条带，分子量在27—28ku之间。本纯化方法的回收率达25．07％，纯化倍数为13．09。关键词：纳豆激酶；分离纯化；玉

2、米烯酮；凝胶层析；离子交换层析中图分类号：R284．2文献标志码：A文章编号：1005—9989(2013)04—0241—04SeparationandpurificationofnattokinasebychromatographyXUHui，WUHui，YINZhi—an，LAIFu—rao(CollegeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510640)Abstract：Inordertoobtainhighpurit

3、ynattokinase，someseparationandpurificationtechniqueswereexplored．Theoptimizedprocessincludes：removingcellsbycentrifugatiOn，30％70％saturationamm0niumsulfateprecipitation．gelfiltrationchromatographywithSephadexG-50andion—exchangechromatographywithQAE-SephadexA一50．Thepurif

4、iedenzymeshowedasingleproteinbandintheSDS—PAGEanditsmolecularweightwas27—28ku．Thepurificationfactorandactivityrecoveryofthenattokinaseare13．09timesand25．07％．respectively．Keywords：nattokinase；separationandpurification；zearalenone；gelchromatography；ion-exchangechromatogr

5、aphy收稿日期：2012—09—17通讯作者作者简介：徐慧(1988-)，女，吉林人，硕士研究生，研究方向为食品质量与安全。【17]RichardJSanten，LawrenceDemers，SusanOhorodnik，王成章，叶建中，郑光耀，等．分子短程蒸馏和重结晶分离eta1．Superiorityofgaschromatography／tandemmass银杏叶甾醇类化合物研究[J]．林产化学与工业，2008，28spectrometryassay(GC／MS／MS)forestradiolformonitoring(2)

6、：43-47ofaromataseinhibitortherapy[J]．Steroids，2007，72：666—王焕民，曹宗巽．气相色谱一质谱法分离鉴定胡桃花粉中671的甾类激素【J】．植物生理学报，1986，12(3)：218—223241‘食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY2013~第38卷第蝴心脑血管疾病是人类健康和生命最大威胁之1．2．3硫酸铵分段盐析分别取10mL发酵上清液一，溶解血栓是治疗这类疾病的重要手段，近年加入不同量的硫酸铵达到不同的饱和度f20％、来研制抗血栓药物已成为医药界研究热点。纳

7、豆30、3540、50606570激酶(Nattokinase，NK)是一种由纳豆菌或纳豆枯草75％、80％)，4℃放置过夜后，12000×gN一1~,30杆菌产生的碱性丝氨酸蛋白酶，日本Sumi等i1】于min。离心所得沉淀分别用10mL10mmol／LpH7．41987年首次从日本传统食品纳豆中发现并命名。的磷酸盐缓冲液溶解。分别测定盐析上清液和沉纳豆激酶具有很强的纤溶活性，能直接作用于纤淀溶解液的纳豆激酶活性，以确定盐析方法。溶蛋白，也能激活体内纤溶酶原，增加内源性溶1．2．4SephadexG一50层析将缓冲液复溶的酶液纤酶

8、的含量，具有降血压、抗氧化、抗肿瘤、溶离心后上SephadexG一50凝胶层析柱(15mm×400解血栓等医学功效。与其他溶栓类药物相比，mm)。柱体积60mL，上样量3mL，流速0．5mL／具有安全性好、成本低、纤溶活性强、作用时间