生物化学实验二费林试剂热滴定定糖法

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1、实验二费林试剂热滴定定糖法13生物基地201300140059刘洋2015-03-28同组者：张奕一、实验目的1、初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。2、正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。二、实验原理还原糖是指含有自由醛展（如：葡萄糖咸酮基（如：果糖）的单糖和某些二糖（如：乳糖、麦芽糖）。在碱性溶液屮，还原糖能将金属离子（Cu2+、Hg2+、Ag+等）还原，而糖木身被氧化成各种轻酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次叩基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化

2、钠，酒石酸钾钠和亚铁觥化钾。当卬、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。万能夹铁架台点滴板水浴锅600瓦电炉三、实验器材25毫升碱滴定管移液管（5、10毫升）100毫升溶量瓶100毫升锥形瓶滴管四、实验试剂[1]费林试剂（定量）：（1）费林甲液:称取15克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和0.05克次甲基蓝,溶于1000毫升水中。（2）费林乙液：称収50克酒石酸钾钠、54克氧氧化钠和4克亚诙锹化钾溶于1000毫升水中。[2]标准葡萄糖溶液：称収匍萄糖（预先在105°C烘

3、T•，恒重）1克，用少量蒸锚水溶解后加入8毫升浓盐酸（防止微生物生长），再用蒸锚水定容至1000毫升。[3]6N盐酸溶液。[4]10%氮氧化钠溶液。[5]碘试剂：将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀释10倍。[6]PH1-14试纸。五、实验步骤1•空白测定准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸憎水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准匍萄糖液直至蓝色消失为I匕。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的

4、总和，就是测定空H时耗用的标准葡萄糖液亳升数(VI)0全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。内此，除控制滴定速度外,滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件2•总糖的测定准确称取面粉1克，加入6“盐酸10毫升，蒸帑水15毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出儿滴水解液用碘化钾■碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠屮和至屮性溶液，过滤，滤液定容至100毫升。准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品

5、液。准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5毫升，混匀，然后按测定空白同样操作进行滴定，记下耗用标准葡萄糖的毫升数。3.计算(V1-V2)X标准葡萄糖液浓度(克/毫升)X稀释倍数还原糖(或总糖)％=X100称取的样品量(克)X5式川：VI为测定空口时耗用标准繭萄糖液毫升数。V2为测定总糖时耗用的标准葡萄糖的毫升数。六、实验结果空白组:滴定前加入量Nl(ml)5滴定消耗N2(ml)7.652(弃掉)5.4515.5525.503V1=(N1+N2)(ml)/10.45110.55210.503平均值Vr(ml)10.502样品组:

6、滴定前加入量N3(ml)4滴定消耗N4(ml)3.5503.9524.003V2=(N3+N4)(ml)7.5507.9528.003平均值V2*(ml)10.502还原糖％=(vr-V2，)一5X100%=53.34%七、讨论与结论本次实验结果不是很令人满童，总结如下：1.对于碱式滴定管操作不熟练，经常在挤压玻璃珠时导致液体不受控制地持续流出，使得该组试验结果作废。2.最初几组滴定由于对滴定重点的颜色变化不熟悉，导致经常滴定过量，由于时间原伙I,无法多次重复实验，使得单组实验结杲ZI'可方差较大。3.滴定时有几纽滴定速度没有控制好，导致滴定时间超过3m

7、in,使得溶液被氧化，提而达到滴定重点。