费林试剂热滴定定糖法.docx

《费林试剂热滴定定糖法.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、生物化学实验报告题目：斐林试剂热滴定定糖法姓名：余振洋学号：200900140156同组者：张刚刚系年级：09级生科3班时间：2011/5/14一、【实验目的】1．初步掌握斐林试剂热滴定定糖法的原理和方法。2．正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。二、【实验原理】还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。斐林试剂由质量分数为

2、0.1g/mL的氢氧化钠溶液和硫酸铜的质量分数为0.05g/mL的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络

3、合物。三、【试验器材】1．25毫升碱滴定管。2．移液管(5、10毫升)3．100毫升容量瓶4．100毫升锥形瓶5．滴管6．点滴板7．水浴锅8．电炉9．玻璃棒，烧杯，分析天平四、【实验试剂】1．费林试剂(定量)：A．费林甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4•5H2O)和0.05克次甲基蓝，溶于1000毫升水中。B．费林乙液：称取50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠和4克亚铁氰化钾溶于1000毫升水中。2．标准葡萄糖溶液（1mg/ml）：称取葡萄糖(预先在105℃烘干，恒重)1克，用少量蒸馏水溶解后加入8毫升浓盐酸(防止

4、微生物生长)，再用蒸馏水定容至1000毫升。3．6M盐酸溶液。4．10%氢氧化钠溶液。5．碘液。6．PH1~14试纸。五、【实验操作】1．总糖的提取准确称取面粉1克，加入6N盐酸10ml，蒸馏水15ml，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100毫升，过滤。准确吸取该滤液10ml，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。2．空白测定准确吸取费林甲、乙液各5ml和蒸馏水5ml放入100ml的锥形

5、瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴1—2滴的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失变成黄色且在30s内颜色又变成深红色为止。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)，平行操作3次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。3．总糖样品的测定准确吸取样品液5ml放于100ml锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5ml，混匀，然后按测定空白同样操作进行滴定，记下耗用标准葡萄糖

6、的毫升数（V2），平行操作3次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。4．计算(V1-V2)×标准葡萄糖液浓度(克/毫升)×稀释倍数还原糖(或总糖)%=×100称取的样品量(克)×5式中：V1为测定空白时耗用标准葡萄糖液毫升数。V2为测定总糖时耗用的标准葡萄糖的毫升数。六、【注意事项】1.菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀；2.总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可以使面粉更容易解，沸水浴30min后检查是否

7、水解完全，若未则应继续加热；3.用酚酞作指示剂时用10%氢氧化钠调PH至7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠；4.空白滴定中一定以每滴1-2秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s内颜色又变成深红色为止；5．全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴

8、定试验时确定，同时练习掌握操作条件6.平行三次后所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。七、【实验结果】1．数据表一斐林试剂热滴定定糖样品管及空白管数据空白测定样品测定123123菲林甲液/ml555555菲林乙液/ml555555样品液/ml555蒸馏水/ml555V1（V2）/ml7.0157.0406.9833.2713.2453.289平均值/ml7.0133.268V1—V2