枝杆菌属（Mycobacterium）

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1、第三节分枝杆菌属(Mycobacterium)分枝杆菌属的分类结核分枝杆菌复合群(生长慢不产色)结核分枝杆菌牛分枝杆菌非洲分枝杆菌田鼠分枝杆菌非结核分枝杆菌Ⅰ群(光产色菌)Ⅱ群(暗产色菌)III群(不产色菌)Ⅳ群(快速生长菌)麻风分枝杆菌(人工培养基不生长)√√结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)1882年3月24日德国细菌学家郭霍发现一、分类结核分枝杆菌复合群(生长慢不产色)结核分枝杆菌(90%)牛分枝杆菌(5%)非洲分枝杆菌(5%)田鼠分枝杆菌二、生物学特性结核杆菌抗酸染色(×1000)结核杆菌的扫描电镜照片结核杆菌菌落“谗

2、、懒、顽、变”“谗、懒”：胞壁含脂质高，营养要求高，生长缓慢；罗-琴(L-J培养基)（含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿等）培养需2-4周有菌落生成“顽”：对某些理化因素抵抗力较强抗干燥：在干燥痰中可生存6-8个月，附在尘埃上传染性可保持8-10d;抗酸碱：抗6%H2SO4或4%NaOH达30min(集菌)抗染料：1:13000孔雀绿或1:75000结晶紫“变”：形态、菌落、毒力及耐药性均可变异卡介苗:毒力变异株（BacilleCalmette-Guerin，BCG）耐药变异株:药物选择作用(应规范用药,药敏试验选敏感药物联合用药)R-S变异:菌落变异L型

3、变异:药物等诱导而成,TSA-L培养基生长肺结核患者外周血中的分枝杆菌伴非抗酸颗粒，培养法　抗酸染色×1000杀灭结菌的方法：1、阳光下暴晒2h；2、5%-12%来苏作用5min-2h；3、75%酒精接触2min；4、煮沸1min；5、焚烧—是最简便的灭菌方法生化反应热触酶试验结核分枝杆菌、牛分枝杆菌(-)非结核分枝杆菌(+)硝酸盐还原试验烟酸试验烟酰胺酶试验结核分枝杆菌(+)牛分枝杆菌(-)三、细菌学检验结核病确诊的重要依据(一)标本的采集与注意事项注意事项标本采集：视病变部位取标本如：痰取晨痰约5ml无菌密闭容器及时接种低温送检痰液合格收检(二)检验程序

4、集菌涂片1、沉淀集菌法：2、漂浮集菌法：生理盐水稀释高压灭菌液化离心，取沉渣二甲苯1ml振荡30min吸取泡沫和油层接界部分意义:阳性可确诊为结核病，有传染性。但检出率低;制定治疗方案和化疗疗效评价的重要指标.√37℃30min4%NaOH染色抗酸染色金胺O染色报告方式镜检结果-仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌±300个视野内发现1~2条抗酸菌＋100个视野内发现1~9条抗酸菌2＋10个视野内发现1~9条抗酸菌3＋每个视野内发现1~9条抗酸菌4＋每个视野内发现9条以上抗酸菌抗酸染色镜检结果报告方式痰检至少2次阳性!!!操作及报告结果标准化《中国结核病防治规

5、划实施工作指南》（2008新版）《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》结核病诊断细菌学检验规程（1995年）生物安全！！请注意：废弃标本和污染物的处理痰盒和废弃标本等污染物，均需经高压蒸汽灭菌后才能丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理。痰盒等污染物如采用焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚烧不彻底或暴露焚烧是有害的。痰检工作面的消毒：可将痰标本置于一搪瓷盘中，在操作橱内进行痰涂片操作。操作完毕后将盘与废弃物等一并进行高压蒸汽灭菌，或与操作台面同时以3％石炭酸或其他可靠消毒液擦拭后，再以紫外线灭菌灯（距离≤1米）照射30min。生物安全！！分离培养与鉴定固体培养基

6、L-J（选择）、PNB和TCH（鉴别）液体培养基（Middlebrook7H9/12和Sauton培养基）L型培养基（TSA-L培养基、92-3TBL）全自动快速培养鉴定药敏系统：Bactec全自动系统等标本前处理后培养!!!Middlebrook7H10/11意义:金标准，阳性可确诊为结核病，有传染性。并可进一步做生化反应、药敏试验，但需时长。、小川培养基标本培养前处理1、痰：酸/√碱处理碱/酸性L-J培养基胰蛋白酶-新洁尔灭法NaOH-NALC法2、脑脊液、胸腹水：离心、沉淀（有污染碱处理）3、尿液：离心、沉淀（碱处理）4、脓液：酸/碱处理报告方式培养结

7、果＋斜面20个菌落以上，占斜面1/4以下2＋斜面上菌落生长面积占1/4以上，1/2以下3＋斜面上菌落面积占斜面1/2以上，3/4以下4＋斜面上菌落生长密集，成菌苔培养结果记录与报告方法分离培养与鉴定固体培养基L-J、PNB、TCH液体培养基（Middlebrook7H9/12和Sauton培养基）L型培养基（TSA-L培养基、92-3TBL）全自动快速培养鉴定药敏系统：Bactec960系统等标本前处理后培养Middlebrook7H10/11意义:金标准，阳性可确诊为结核病，有传染性。并可进一步做生化反应、药敏试验，但需时长、小川培养基Bactec460B

8、actec9000MBBactecMGIT960L菌