基于辟谷理念的隔日限食疗法对大鼠脊髓损伤后NF-κB信号通路的影响

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1、学位论文基于辟谷理念的隔日限食疗法对大鼠脊髓损伤后NF-κB信号通路的影响TheeffectofBIGUtheorybasedevery-other-dayfastingonNF-κBsignalpathwayinratsafterspinalcordinjury孙年怡指导教师姓名：张安仁教授申请学位级别：博士专业名称：针灸推拿学论文提交时间：2017年5月论文答辩时间：2017年5月二○一七年五月万方数据成都中医药大学博士学位论文中文摘要目的：1.在“经络理论”和“从脾论治思路”的指导下，以干预措施隔日限食和研究对象脊髓损伤为载体，研究辟谷理念在督脉受损病证中的应用，为其应用范围

2、的拓展提供实验证据。2.采用医用脑血管临时动脉瘤夹建立大鼠脊髓钳夹损伤模型，采用隔日限食进行干预，观察隔日限食对脊髓损伤大鼠脊髓组织病理变化和运动功能恢复的影响，并初步探索其对脊髓损伤急性期NF-κB信号通路及炎性相关细胞因子表达的影响，为今后继续研究隔日限食在促进脊髓损伤恢复过程中的作用机制提供实验依据，奠定实验基础。方法：1.动物来源及模型制备：选用购自成都达硕生物科技有限公司的实验用SD成年大鼠（实验动物质量合格证号：SCXK(川)2015-030），雌性，SPF级，体重280-310g。采用医用脑血管临时动脉瘤夹（夹闭力70g）制备T10脊髓钳夹损伤大鼠模型。2.实验分组：

3、实验中大鼠随机分为如下四组：A组：脊髓损伤+隔日限食组，B组：脊髓损伤组，C组：假手术+隔日限食组，D组：假手术组。假手术组仅接受椎板切除术。隔日限食组大鼠术后立即开始禁食24小时（仅供饮水，下同），之后给予24小时常规食物，然后再给予禁食24小时，如此反复直至试验结束。非隔日限食组大鼠自由进食、饮水。3.将36只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组，每组9只，观察隔日限食对脊髓钳夹损伤模型大鼠脊髓组织病理变化和运动功能恢复的影响，实验周期为12周：观察各组大鼠术后进食量与体重变化；分别于术前1天及术后1天、术后第1、2、4、6、8、10、12周，采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能的

4、恢复情况；术后第12周做苏木精-伊红染色切片和甲苯胺蓝染色切片，观察各组大鼠脊髓损伤组织的结构改变。4.将180只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组，每组45只，在术后6小时、1万方数据基于辟谷理念的隔日限食疗法对大鼠脊髓损伤后NF-κB信号通路的影响12小时、1天、3天、7天五个时间点，采集血清标本和脊髓组织，采用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测大鼠脊髓损伤区NF-κBp65和I-κBαmRNA的表达，免疫印迹（WesternBlot）检测大鼠脊髓损伤区I-κBα蛋白的表达情况，凝胶迁移试验（EMSA）检测大鼠脊髓损伤区NF-κBp65的DNA结合活性，酶联免疫

5、吸附试验（ELISA）检测血清TNF-α、IL-10水平，观察隔日限食对脊髓损伤大鼠NF-κB信号通路和炎性相关细胞因子水平的影响。结果：1.隔日限食疗法对脊髓损伤大鼠运动功能恢复及脊髓组织结构的影响⑴术前各组大鼠每日进食量与体重没有显著差异。术后4周当中，隔日限食组大鼠在进食日的进食量显著多于自由进食组（P<0.01）。其中，在第2、3周，A组大鼠进食日的进食量较B组大鼠相比增加了约90%（P<0.01,P<0.05），在第2-4周，C组大鼠进食日的进食量较D组大鼠相比增加了约75%（P<0.01）。不过，尽管EODF组大鼠在进食当日的进食量对禁食期间的零摄入量进行了一定补偿，但

6、是其总体摄食量较自由进食组减少（约10%）。术后，A、B、C组大鼠体重呈现出1-3周的下降趋势后逐渐增加，B组和C组大鼠分别在术后8周和3周左右恢复至术前水平，在术后12周A组大鼠体重仍未恢复至术前水平。⑵接受SCI术的A、B组大鼠BBB评分在术后降至最低，随时间逐渐增加。术后1天，A、B组大鼠术后均表现为典型的截瘫体征，无可见后肢运动，BBB评分显著低于假手术组的C、D组，差异具有统计学意义（F=5272.076，P=0.000）。术后第8、10、12周，A大鼠后肢活动改善明显，可见频繁爪掌面承重移动、前后肢协调动作，A组评分高于B组，组间差异有显著性意义（P<0.05）。⑶HE

7、染色：A组：视野中脊髓白质内可见空泡，可见脊髓神经纤维轴突萎缩、髓鞘肿胀。B组：视野中脊髓白质内有许多明显可见的空泡，神经纤维轴突萎缩、髓鞘显著肿胀；可见纤维细胞增生；可见有炎性细胞浸润。C、D组：组织形态结构正常，未见明显病理改变。HE染色结果显示A组大鼠较B组大鼠脊髓损伤病变程度轻，隔日限食对大鼠脊髓损伤具有一定的保护作用。⑷甲苯胺蓝染色：A组：可见脊髓蝴蝶型灰质区损伤严重结构不清，局灶性坏死脱落，神经细胞大量减少，结缔组织增生并伴有炎性细胞浸润；剩余神经元2万方