东亚飞蝗Sex-lethal基因的克隆、表达及功能初步研究

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1、硕士学位论文东亚飞蝗Sex-lethal基因的克隆、表达及功能初步研究王鹏指导教师：何正波教授陈斌教授学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：昆虫分子生物学重庆师范大学生命科学院2014年4月万方数据重庆师范大学硕士学位论文东亚飞蝗Sex-lethal基因的克隆、表达及功能初步研究硕士研究生：王鹏指导教师：何正波教授陈斌教授学科专业：生物化学与分子生物学所在学院：生命科学学院重庆师范大学2014年4月万方数据DissertationforMaster’sDegreeofChongqingNormalUniversityCloni

2、ng,expressionandpreliminaryfunctionalanalysisofSex-lethalgenesfromorientalmigratorylocust,Locustamigratoriamanilensis(Meyen)Candidate:PengWangSupervisor:ZhengboHe(Professor)BinChen(Professor)Major:BiochemistryandMolecularBiologyCollegeCollegeofLifeSciencesChongqingNo

3、rmalUniversityApril,2014万方数据重庆师范大学硕士学位论文中文摘要东亚飞蝗Sex-lethal基因的克隆、表达及功能初步研究摘要东亚飞蝗Locustamigratoriamanilensis(Meyen)属于直翅目，是一种渐变态昆虫，具有发达的翅和较强的飞翔能力，能够群集而远距离迁飞，是其具有较大危害性、造成重大经济损失的主要原因。性别决定与分化是影响东亚飞蝗生殖、发育和种群结构的关键因素，但迄今为止东亚飞蝗性别决定的分子机制还没有人研究。Sex-lethal（sxl）基因是黑腹果蝇（Drosophilam

4、elanogaster）性别决定通路上的关键基因，在黑腹果蝇性别决定中的作用已有深入的研究。除此之外，家蚕（Bombyxmori）、豌豆长管蚜（Acyrthosiphonpisum）、埃及伊蚊（Aedesaegypti）、冈比亚按蚊（Anophelesgambiae）、意蜂（Apismellifera）、橄榄果实蝇（Bactroceraoleae）、地中海果实蝇（Ceratitiscapitata）和红颜金蝇（Chrysomyarufifacies）等昆虫的Sxl基因也有报道。东亚飞蝗的Sxl尚无研究报道。本研究以东亚飞蝗为实验

5、材料，克隆了Sxl基因的全长cDNA序列；采用定量PCR方法研究Sxl基因在东亚飞蝗不同组织和不同发育时期的表达情况，并采用RNAi技术初步研究了Sxl基因在东亚飞蝗体细胞性别决定中的作用。研究结果如下：①东亚飞蝗Sxl基因的克隆和分析采用生物信息学的方法从东亚飞蝗转录组数据库中克隆了Sxl基因的片段，采用RACE技术克隆到全长cDNA序列，长1039bp，开放阅读框747bp，编码248个氨基酸，推测蛋白质分子量为28.1kDa，等电点为9.11。与豌豆长管蚜（Acyrthosiphonpisum）的相似性最高，保守结构域分析

6、发现Sxl基因含有两个RNA识别基序（RNArecognitionmotif，RRM）。②东亚飞蝗Sxl基因在不同不同发育时期和组织的表达情况东亚飞蝗Sxl基因在胚胎发育时期表达水平较低，随着胚后发育表达水平逐渐增强，成虫的表达水平最高，但在雌雄成虫之间差异不明显；在研究的组织中，Sxl基因在雌雄组织之间差异表达，雌虫明显高于雄虫，尤其是在雌虫的头部、脂肪体、体壁、精巢和卵巢中表达水平较高。③东亚飞蝗Sxl基因功能的的初步研究采用RNAi技术抑制Sxl基因在胚胎发育过程中的表达。半定量PCR检测注射dsRNA后Sxl基因的表达情

7、况，结果表明注射dsRNA24小时后，Sxl基因的表达水平I万方数据重庆师范大学硕士学位论文中文摘要已显著下降。统计孵化后的雌雄比例，发现Sxl基因RNAi与对照的雌性比例无差异，说明东亚飞蝗Sxl基因有可能与性别决定无关。关键词：东亚飞蝗，性别决定，Sxl，基因克隆，RNA干扰II万方数据重庆师范大学硕士学位论文英文摘要Cloning,expressionandpreliminaryfunctionalanalysisofSex-lethalgenesfromorientalmigratorylocust,Locustamig

8、ratoriamanilensis(Meyen)ABSTRACTOrientalMigratoryLocust[Locustamigratoriamanilensis(Mayen)],whichbelongstoOrthoptera,isakindofinsec