Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用

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1、分类号：R361.3单位代码：10183研究生学号：2015712046密级：公开吉林大学硕士学位论文研抑（学术学位）制前列吉腺Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用癌林董细Claudin-6inhibitstheproliferation,migrationandinvasionofprostate大兵胞学增cancercells殖噤迁移和侵袭的作用作者姓名：董兵专业：病理学与病理生理学研究方向：肿瘤病理生物学指导教师：全成实教授培养单位：基础医学院2018年5月Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖

2、、迁移和侵袭的作用Claudin-6inhibitstheproliferation,migrationandinvasionofprostatecancercells作者姓名：董兵专业名称：病理学与病理生理学指导教师：全成实教授学位类别：医学硕士答辩日期：2018年5月28日未经本论文作者的书面授权依法收存和保管本论文书，面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则应承担侵权的法律责

3、任。，吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名，曰期：年了月日中文摘要Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用前列腺癌是前列腺上皮源性恶性肿瘤，转移和复发是晚期前列腺癌患者主要的死亡原因。目

4、前研究认为，肿瘤的生长和转移受多种因素调控，其中紧密连接（tightjunction，TJ）与肿瘤细胞的增殖、运动以及侵袭等转移表型密切相关。紧密连接蛋白CLDNs作为紧密连接的主要构成成分，其表达异常能够影响紧密连接结构、功能以及相关的细胞信号传递，在上皮来源恶性肿瘤的发生和转移过程中起着重要作用。Claudin-6作为紧密连接蛋白CLDNs家族的成员之一，对维护细胞间紧密连接结构和功能起着重要作用。我们课题组的前期研究中，发现claudin-6能够明显抑制乳腺癌，宫颈癌，结肠癌细胞的迁移侵袭能力；推测claudin-

5、6表达沉默可能在上皮来源的恶性肿瘤发生转移过程中发挥着作用。目前，关于前列腺癌细胞中claudin-6是否能够抑制前列腺癌细胞侵袭表型的研究尚未见报道。本文通过使用分子生物学技术，首次研究claudin-6对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用，为前列腺癌治疗提供一定的理论支持。目的：探讨过表达claudin-6对前列腺癌细胞生物学表型的影响。方法：通过RT-PCR和WesternBlot方法检测人前列腺癌细胞LNCAP和DU145中claudin-6基因和蛋白的表达状况；利用携带claudin-6的慢病毒转染前列腺癌细胞

6、LNCAP和DU145，经过嘌呤霉素（puromycin；PM）筛选获得过表达claudin-6的稳定克隆；通过RT-PCR、WesternBlot及细胞免疫荧光法鉴定慢病毒转染效率以及稳定细胞克隆中claudin-6蛋白的表达和定位；利用CCK-8试剂盒检测前列腺癌细胞的增殖能力并绘制细胞增殖曲线；流式细胞术检测过表达claudin-6后前列腺癌细胞周期的分布情况；通过跨上皮电阻实验检测前列腺癌细胞LNCAP和DU145的跨上皮电阻；通过倒置显微镜观察过表达claudin-6后前列腺癌细胞形态的改变；通过鬼笔环肽荧光染

7、色法观察过表达claudin-6后前列腺癌细胞骨架的改变；细胞划痕实验、Transwell小室实验检测过表达claudin-6后前列腺癌细胞的迁移侵袭能力；WesternBlot检测过表达claudin-6后，EMTI相关蛋白的表达情况。结果：RT-PCR和WesternBlot结果显示，前列腺癌细胞LNCAP和DU145中claudin-6低表达；慢病毒转染后获得过表达claudin-6的稳定克隆LNCAP和DU145；RT-PCR和WesternBlot结果显示，过表达claudin-6组的RNA以及蛋白水平表达均明

8、显高于空载组；细胞免疫荧光染色实验结果显示，转染目的基因组中claudin-6均有表达，并且主要表达于细胞膜上，而空载组未见明显表达；CCK-8细胞活性实验结果显示，与空载组相比，过表达claudin-6组细胞的增殖能力均有下降；流式细胞仪检测细胞周期的结果显示，过表达claudin-6组细胞增殖活性与空载组相比均有