微生物限度、无菌检查及方法学验证问答集结帖

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1、微牛物限度、无菌检查及方法学验证问答集结帖PostBy：2006-8-2722:29:462005版药典颁布以后，在微生物限度、无菌试验以及方法学考察方面人家冇了很多的疑问和问题。在我们抗生素工作网站论坛屮大家都根据问题进行了很多的讨论和研究，使所有参与的朋友都有所收获。为了更方便大家查阅已经讨论过的问题，我们开设了这个微生物限度、无菌的试验与方法学验证集结帖。希望大家能将口己提出的已经被别的朋友明确解答的问题、或者您回答的别人的问题且已经得到认可的，依据我们提供的格式整理好粘贴在这里。我们将对于人家贴出的内容进行整理和归类，并且请相关的专家复核后，集结成册。同时加入咱们在试

2、验屮常用的一些参数，器材的规格数据表格、附录。编一个咱们抗生素工作网站论坛自己的工具书我们希望能完成这样一个东西给大家，作为我们网站对于大家的一种回报吧。具体大家集结的问答格式如下：问：答：关键词：举一个例子：问：生葩梭菌如何传代？答：半同体培养基穿刺培养，或者用硫乙醇酸盐流体培养基培养传代。关键词：生砲梭菌传代这样就完成了一个帖子，大家只要在咱们当前这个帖子一个个回复下去就可以了，这个帖子会长期存在，完成集结后，大家也可以方便的在这里检索问题，寻找已有的答案。我们问题收集的工作是t期存在的，但是为了集结这个工具手册给大家，我们第一阶段问题收集时间暂时定在：2006年8月28

3、口至2006年10月8口10月8口后我们会进行整理复核工作，希望年内能把这个工具手册带给大家。因为这个帖子是集结帖子，因此只接受大家提交的问答集结帖，请不要在这个帖子里面进行其他内容的回复，如有不明口的地方或者任何一件和建议请大家另开帖子提出，这样方便我们最后的整理工作。我们的水平冇限，我们只希望能够用我们R己微薄的力量给大家的工作带来一点点便捷。希望大家支持我们，谢谢。［此贴子已经被作者于2006-8-2722:37:34编辑过］问：如何理解培养基稀释法?答：通过增大培养基的量来稀释供试液，从而消除供试品抑菌作用常用的一种方法。关键词：培养基稀释法问：培养基稀释法屮每皿的加

4、菌量是多少，如何理解？答：每皿加菌量为50—100CFU/m1的菌液lml•原因为.①培养基稀释法稀释的为供试液，而非菌液；②只有毎皿加51菌液，每血的菌数方能符合菌数计数规则(细菌酵母菌30〜300,霉菌30^100),药典附录中所耍求的菌液稀释所达到的每毫升菌落个数才有意义；关键词：培养基稀释法加菌量问：培养基稀释法的取液量和平皿数具体为多少？答：以0.2ml/jni.为例，①试验组：最低稀释级供试液0.2ml+lml菌液2个平血②菌液组：lml菌液2个平皿③供试品对照组:最低稀释级供试液0.2ml2个平皿④稀释剂对照组:稀释剂0.2ml+lml菌液2个平皿关键词：培养基

5、稀释法问：如何理解中国约典中纯化水的微生物限度检验方法？答:⑴药典规定纯化水：微生物限度取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查(附录X【J),细菌、霉菌和酵母菌总数每lml不得过100个。⑵取样量与方法:取样量可以为1ml或是10ml或者其他体积，最后换算成1ml便可.但是方法一定是薄膜过滤法•因为薄膜过滤法可以将供试液经抽虑后可以将可能存在的冇抑菌作用的成分滤去，可以防止有抑菌作用的成分影响结果，常规法却不能.⑶USP-29中关于纯化水的检验方法与检验量都没冇具体规定:METHOD:"POURPLATEORMEMBRANEFILTRATIONMETHODn,SampleVo

6、lume:"1.0mLminimum,—amaximumsamplevolumeofaround250to300mLisusuallyconsidered—,—whensamplevolumeslargerthanabout2mLareneeded—”•与我国药典唯一的不同就是，我们规定了方法，这也是我们的药典委员会根据我国国情所制定的具有中国特:色的检验方法2—・(4)药典纯化水正文中规定了微生物限度的方法，所以不需要大家再验证；(5)药典屮正文和附录都未要求纯化水做控制菌的检查，所以也不需要做.关键词:纯化水微生物限度检验问：如何理解药典附录中无菌检查检验量的问题答：(1

7、)检验量①若每支(瓶)供试品的装量按药典附录表2、表3规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。每个容器装量不够接种两种培养基，检验容器数加倍。①薄膜过滤法的检验量应不少丁•直接接种法的总接种量（接种两种培养基的量的和）②只要供试品特性允许（包括溶解性，抑菌性等），应将所有容器内的全部内容物过滤。③若由于供试品的特性（如抑菌作用太强），按要求对其供试液进行处理后，述不符合验证试验的规定，那么检验量可酌情减少，但是每支（瓶）供试品的取样量应不少于直接接种法的供试品总接种量。