硅霜微生物限度检查方法学验证

《硅霜微生物限度检查方法学验证》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、硅霜微生物限度检查方法学验证硅霜微生物限度检查方法学验证【中图分类号】R287【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2011)07-0161-01【摘耍】目的验证硅霜微生物限度检查方法的专属性和有效性。方法采用直接接种法和培养基稀释法对硅霜进行验证试验，并测算菌回收率。结果硅霜以直接接种法检查，白色念珠菌、黑曲霉菌的菌回收率＞70%,采用培养基稀释法后金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌的菌冋收率＞70%。结论硅霜可以用直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查，以培养基稀释法测定细菌总数。【

2、关键词】硅霜；微生物；限度检查；验证硅霜用于治疗辍裂、皮炎，并能防止银宵病治愈后复发。主要是护肤防裂。为保证药品质量，按照中国药典2005版［1］的要求，对其微生物限度检查方法进行验证，如下。1实验材料1.1培养基:培养基均购自中国药品生物制品检定所。1・2菌种:大肠埃希菌(CMCCB44102)第2代，枯草芽抱杆菌(CMCCB63501)第2代，金黄色葡萄球菌(CMCCB26003)第2代，白色念珠菌(CMCCF98001)第2代，黑曲霉菌(CMCCF98003)第2代1.3稀释液:pH=7.0无菌氯化钠

3、-蛋白腺缓冲液。1・4样品：硅霜(201006022010060320100604牡丹江市皮肤病防治研究所)2方法2.1直接接种法供试液制备:取供试品10g三份，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的容器中，充分振摇使供试品溶解,然后加入40°C~45°C的PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,振摇5〜10分钟，萃取，静置，使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液，取2niL分别加入置2个平皿中。1.2直接接种法菌液制备:取1:10供试液2mL,分别加入置2个平肌屮，再分别加入大肠埃

4、希菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50〜100个菌/niL的菌液lmL,作为加阳性菌供试液样。每种菌制备2份。2.3培养基稀释法供试液的制备:将1：10供试品溶液lmL,分别注入10个平皿中，每个0.lmL,10个为一组，共两组。2.4培养基稀释法加阳性菌供试液的制备:将1：10供试品溶液ImL,分别注入10个平皿中，每个0.lmL,10个为一组，再分别加入大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、口色念珠菌、黑曲霉50-100个菌/niL的菌液ln)L,每种菌株两组。2.5操作步骤2

5、.5.1直接接种法:取1：10供试液2niL注入2个平皿中，分别加入大肠埃希菌、枯草芽鞄杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50〜100个菌/n)L的菌液lmL,作为加阳性菌供试液样。每个菌制备2个平皿。2.5.2培养基稀释法:将1：10供试液2mL,分别注入20个平皿，再分别加入大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50〜100个菌/niL的菌液lmL,每组10个平皿，每个菌株两组。分别加入已溶化保温至45°C营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基15mLo每ImL供试晶溶液所注的

6、平皿中生长的菌落Z和为ImL,计算每ImL供试品溶液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌落数。2.5.3大肠埃希菌检查:取1:10供试品溶液lOmL接种于胆盐乳糖培养基中,培养24h,取上述培养物0.2mL,接种至含5mLMUG培养基的试管内，培养，于5、24h在365nm紫外线观察，同时用未接种的MUG培养作本底对照。管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。2.6培养:各平皿培养基凝固后，细菌检查平皿置30〜35°C培养箱48h,霉菌检查平皿置23〜28°C培养箱72h。2.7样品微生

7、物限度测定:取供试品10mL,加pll二7.0无菌氯化钠-蛋口月东缓冲溶液90mL,混匀，分别按常规法和培养基稀释法各3份进行操作。3结果硅霜以常规方法检查，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、白色念球菌、黑曲霉各菌的平均回收率分别为60.5%、44.3%、67.4%.95.4%、98.0%。该样品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的检出均有影响，而对口色念球菌、黑曲霉的加样回收率均高于70%,故认为常规法测定霉菌和酵母菌总数是符合中国药典2005年版的要求的；采用培养基稀释法金黄色葡萄球菌、

8、大肠埃希菌、枯草芽鞄杆菌各菌的平均回收率分别为86.2%、95.6%.88.8%,均高于70%,故认为培养基稀释法测定细菌总数是符合中国药典2005版的要求的。控制菌检查硅霜无明显的影响，故控制菌采用常规法进行检验。4结论硅霜可以使用常规法即直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查，以培养基稀释法测定细菌总数检查。参考文献[1]中国药典2005年版二部[S].2005.附录93-101・作者单位157011牡丹