AS1411介导STAT3反义寡核苷酸靶向抗肿瘤的作用

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1、AS1411介导STAT3反义寡核昔酸靶向抗肿瘤的作用刘宝修黄建胜朱乃硕复旦大学生命科学学院分子感染与免疫实验室摘要：目的研究核仁素核酸适配体(AS1411)介导信号转导与转录激活因子3(signaltranscluctionandactivatoroftranscription3,STAT3)反义寡核昔酸(antisenseoligonucleotide,ASO)靶向抗肿瘤的作用。方法以RNA为耦联分子，连接靶向分子AS1411和效应分子ASO。以RNAStructure软件对预合成的不同RNA碱基耦联构建的嵌合体分子二级结构进行预测分析。以琼脂糖凝胶电泳检测嵌合体分子在血清及细胞裂解液屮

2、的稳定性。通过流式细胞术和荧光共聚焦实验检测AS1411介导STAT3ASO进入肿瘤细胞的情况。通过CCK-8试剂盒检测STAT3ASO对肿瘤细胞生长的抑制情况。通过RT-PCR和Westernblot分析ASO对肿瘤牛长相关基因表达的影响。结果AS1411T1J介导STAT3ASO高效进入肿瘤细胞,抑制C-myc、CyclinDI、Bcl-xl和PD-Ll基因的转录和翻译，并能抑制Dul45细胞的生长。结论AS1411可介导STAT3ASO靶向进入肿瘤细胞，从而发挥抗肿瘤的作用。关键词：反义寡核昔酸;AS1411;抗肿瘤;靶向;作者简介：ZHUNai-shuoE-mai1:nzhu@fud

3、an.edu.on收稿日期：2016-10-31基金：国家自然科学基金(30901315,30970144)ApreliminarystudyofAS1411mediatedSTAT3antisenseoligonucleotidetargetingtumorcellsLIUBao-xiuHUANGJian—shengZHUNai-shuoLoboratoryofMolecularInfectionandImmunology,SchoolofLifeSciences,FudanUniversity;Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofAS1411-me

4、diatedsignaltransductionandactivatoroftranscription3(STAT3)antisenseoligonucleotide(ASO)targctingtumorcells.MethodsRNAwasusedascouplingmoleculestolinkthetargetingmoleculesAS1411andeffectormoleculesASO.Predictionandanalysisofthesecondarystructureofthepre-synthesisofchimericmoleculesbyRNAStructuresof

5、tware.Agarosegelelectrophoresiswasusedtotestthestabi1ityofchimericmoleculesinserumandcel1lysissolution・UsingflowcytometryandconfocalfluorescencemicroscopewereusedtoestimatetheinternalizationofAS1411-mediatedSTAT3ASO.InhibitoryeffectofASOonthegrowthoftumorcellswasdetectedbyCCK-8kit.RT-PCRandWesternb

6、lotwasusedtomeasuretheexpressionlevelsoftumorrelatedgenes.ResultsSTAT3ASOsmediatedbyAS1411cancntertumorcellsofficicntlytotranslationofC-myc,CyclinDI,inhibitthegrowthofDul45cells,canentertumorcel1sandactasinhibitthetremscriptionandBcl-xlandPD-L1gene,andalsocanConclusionsAS1411-mediatedSTAT3ASOanti-t

7、umormedicine.Keyword：antiscnscoligonuclcotidc;AS1411;emti-tumor;torgeting;Received：2016-10-31肿瘤是威胁公共健康的一类严重的疾病。近年来，我国肿瘤的发病率及死亡率均逐年上升。免疫抗肿瘤疗法是近年来新兴的抗肿瘤治疗手段，主要包括以单克隆抗体介导的单抗药物疗法和嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(chimericantigenre