靶向角蛋白17反义寡核苷酸和sirna对银屑病scid小鼠模型的治疗作用

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1、第四军医大学硕士学位论文缩略语表缩写词英文名称中文名称AbAntibody抗体Anti-keratin17monoclonal抗角蛋白17单克隆anti-K17mcAbantibody抗体ASODNAntisenseOlignucleotides反义寡核苷酸BpBasepair碱基对BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白cDNAcomplementaryDNA互补DNAConAconcanavalinA刀豆蛋白ADiaminobenzidine3,3’-二氨基联苯DAB胺DEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DNADeoxyr

2、ibonucleicacid脱氧核糖核酸dsRNADoublestandedRNA双链RNAEBEthidiumbromide溴化乙锭EDTAethylendiaminotetraaceticacid乙二胺四乙酸FCSfetalcalfseum小牛血清IFNγgammaInterferonγ干扰素ILinterleukin白介素KCKeratinocyte角质形成细胞K17Keratin17角蛋白17mRNAmessengerRNA信使RNAPolyacrylamidegel聚丙烯胺凝胶电泳PAGEelectrophoresis1第四军医大学博士学位论文独创性声明

3、秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文

4、工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：2第四军医大学硕士学位论文靶向角蛋白17的反义寡核苷酸和siRNA对银屑病SCID小鼠模型的治疗作用硕士研究生：常婷导师：王刚副教授高天文教授第四军医大学西京医院全军皮肤病研究所，西安710032中文摘要银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，一定的遗传背景、感染作为诱因、以T细胞为主的细胞免疫紊乱是银屑病发病机理中的三个重要环节

5、。角蛋白17（K17）是相对分子量（Mr）为46000的Ⅰ型角蛋白，在正常表皮不表达（主要分布在生长期毛囊、汗腺等组织），而在银屑病皮损处呈高表达。研究发现，K17与链球菌M蛋白具有交叉抗原特性，其表面含有多个T淋巴细胞活化表位，能够刺激T细胞，使之活化、增生、释放炎症因子γ干扰素（IFNγ）等，而IFNγ又能够诱导增加K17的表达，从而在K17和T细胞之间形成一个相互促进的环路，导致炎症反应和表皮细胞异常增生等病理改变，是银屑病发病机理中的重要环节。鉴于K17在银屑病病理过程中的特殊意义和关键作用，我们提出将K17作为治疗银屑病的一个新的药物作用靶点，探讨更加特

6、异和有效的治疗策略。我们以往的研究发现，抗角蛋白多克隆自身抗体和抗角蛋白17单克隆抗体均能够以剂量依赖的方式抑制表皮角质形成细胞（KC）的增生，在银屑病体外模型和普萘洛尔诱导的银屑病样皮炎动物模型中，均可以逆转包括KC异常增生、炎症性细胞因子过度表达等在内的一系列病理改变，显示出对银屑病良好的治疗效果。在此基础上，本课题组应用反义技术及RNA干涉（RNAi）3第四军医大学硕士学位论文技术，将针对K17的反义寡核苷酸（K17－ASODN）以及小干涉RNA（K17－siRNA）转染体外培养的角质形成细胞，结果发现二者均能抑制角质形成细胞的增生，并诱导其凋亡。本研究的目

7、的是通过在体实验进一步验证K17－ASODN和siRNA对银屑病的治疗作用，确认K17作为治疗银屑病的药物作用靶点。我们采用目前公认的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠银屑病皮损移植模型，将K17－ASODN和siRNA用脂质体包裹，局部外用于移植皮损，继而通过移植皮片的大体改变和组织病理学等特征观察治疗效果，并采用反转录PCR（RT-PCR）以及免疫组化的方法分别从核酸及蛋白水平检测了K17的变化，为研究银屑病新的基因治疗策略进行了积极的尝试。本研究的主要实验方法及结果如下：一、银屑病SCID小鼠动物模型的构建1.供体、受体来源移植皮片均来自我科新入院、本次入院前

8、未作任何治