实验二 利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯

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1、实验二利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯一、目的要求1．掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术；3．熟悉建立分析方法的基本思路。二、仪器和试剂岛津液相色谱仪LC-10AT、SPD-10A紫外-可见光检测器、CDT-10AS贮温箱、C18色谱柱、微量注射器10ul；溶液：苯标准液；甲苯标准液；苯、甲苯混合标准溶液：三、操作步骤1、最佳分离条件的选择启动仪器，先注入5微升的甲醇流动相，观察检测器当峰斜率小于1000是，设定流动相甲醇含量为60%，注

2、入5微升的苯与甲苯混合液，观察检测器显示的两峰的保留时间及分离效果。双峰显示完毕后，改变流动相甲醇含量为80%，观察检测器显示的两峰保留时间及分离效果。1．色谱条件优化由上图可知，当甲醇的含量为85%时，能将两者分开，且时间较短，因此可选甲醇含量为85%作为实验条件。2．苯、甲苯定性分析在最佳分离条件下，用10μL微量注射器，分别注射5.0μL苯、甲苯的标准溶液，观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰苯甲苯样品苯甲苯保留时间3.1773.8723．苯、甲苯定量分析在最佳的分离条件下，用10μL微量注

3、射器，分别注射5.0μL的0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的混合标准溶液（各重复实验2次），再分别测定苯和甲苯的峰面积，求出平均值，以峰面积对浓度作图，作出标准曲线。在最佳的分离条件下，用10μL微量注射器，分别注射5.0μL的试样（重复进样2次），观察记录保留时间和峰面积。根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测夜的浓度，取两次平均值为试样中苯和甲苯的含量。苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1ul/ml,2ul/ml,5ul/ml,10ul/ml。浓度峰面积浓度峰面积1

4、ul/ml1403931ul/ml3135702ul/ml3216302ul/ml6429555ul/ml8112885ul/ml148099510ul/ml157221910ul/ml2710495Y=aX+ba=158314.2b=-1031.558R^2=0.9993084R=0.9996541Y=aX+ba=264149.7b=98330.34R^2=0.9978541R=0.9989265苯甲苯