液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯.doc

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1、华南师范大学实验报告课程名称仪器分析实验实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型□验证□设计□综合实验时间2010年3月31日实验指导老师实验评分一、实验目的1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内。由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过

2、程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，记录成数据。液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5%。定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。外标法为标准物质标准溶液制定标准曲线法；内标法为在标准溶液、样品溶液中加入内标物质，以相对峰高、相对面积对标准物质的浓度制定标准曲线；面积归一化法假定所有出峰物质的吸光系数相同，计算某物质的峰面积占所有峰面积的百分比。三、仪器与试剂

3、：1.仪器：SCL-10Avp紫外可见双波长检测器；SPD-M10Avp柱温箱；LC-10AT高效液相色谱仪；10μL微量注射器2.试剂：2μL/mL苯标液；2μL/mL甲苯标液；0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的苯与甲苯的混合标准溶液；甲醇溶液；待测试样溶液四、实验内容与步骤：1.选择合适的流动相配比，优化色谱条件设置有关参数：控制流速为1mL/min。柱温30℃，检测波长354nm。5设置流动相配比（甲醇：水=1：1），用10μL微量注射器注射5μL的10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液进行

4、测定，观察其分离度和出峰时间。然后改变流动相配比，改进分离，调整出峰时间。从而得到最佳测定条件。2.苯、甲苯定性分析：在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器，分别注射5μL2μL/mL苯的标准溶液和2μL/mL甲苯的标准溶液。观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰。3.苯、甲苯定量分析：在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器，分别注射5μL0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液，再分别测定苯和甲苯的峰面积，以峰面积对浓度作图，做出工作曲线。在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器

5、，注射5μL的试样，观察记录保留时间和峰面积。根据峰面积在工作曲线上查处苯和甲苯待侧溶液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。五、数据记录及结果分析：1.优化色谱条件95%85%75%由上图可得，在流动相中，甲醇低于75%时，出峰时间过长；甲醇占95%时，虽然出峰时间短，但是两峰的分离度不好。经过多次调整，最终确定在流动相中，甲醇占85%时，分离度好，出峰时间合适，因此，确定了最佳的流动相配比是，甲醇：水=85%：15%。2.定性分析结果：5苯甲苯样品苯甲苯保留时间3.1763.877从上结果可得，苯的保留时间比甲苯的短。即

6、是测定混合溶液时，前峰为苯的峰，后峰为甲苯的峰。3.定量分析结果（1）标准曲线的绘制：苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：0.2ul/ml,2ul/ml,4ul/ml,10ul/ml。10ul/ml0.2ul/ml5苯甲苯浓度峰面积浓度峰面积0.2ul/ml556720.2ul/ml1131052ul/ml4281772ul/ml7513194ul/ml8234084ul/ml134139910ul/ml204686110ul/ml2885707Y=aX+ba=205179.4b=0.0R^2=0.9999732R=0.999

7、9866Y=aX+ba=297800.1b=0.0R^2=0.9955391R=0.9977671（2）未知样品浓度未知样品苯甲苯浓度1.4ul/ml3.3ul/ml六、总结讨论1.本次实验用的色谱柱的填充物是表面键合了碳十八的二氧化硅，甲苯和碳十八之间的亲和力比较强，另外，苯和甲苯的极性相差不大，但苯的分子量较小，较容易流出，5因此苯先出峰。2.实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单。只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果。而采用归一化法或内标法，虽然能

8、得到准确更高的实验结果，但由于实验操作、计算复杂，不能快速分析，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。3.本次实验绘制得的标准曲线的相关系数非常接近1，但是比较苯和甲苯两条标准曲线的相关系数，甲苯的标准曲线的相关系数较低，可能是由于甲苯的稳定性比苯的差，甲苯在实验过程中，少量被氧化。另外，所得的紫外谱图