治疗性单克隆

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1、治疗性单克隆・doc治疗性工程抗体的研究进展来自：生物01杨12摘要】单克隆抗体从问世到应用于临床，经历了一段曲折的发展历程，其中基因工程抗体是--个巫要的里程碑，并伴随着一•系列巫人的技术革新。利用抗体工程技术HJ研制出性能和特点各不相同的高效治疗性抗体，如增强效应功能的全长抗体、传递细胞毒作用的免疫壽索、抗体与细胞因子连接的融合蛋门，以及锚定多种受体的双特异抗体等。本综述介绍了近年来治疗性抗体工程的进展。【关键词】工程抗体；治疗性抗体；双特界抗体；效应功能自从1975年Khler和Milstein应用杂交瘤细胞产生单克隆抗体(monoclonalantibody

2、,mAb)以來，有关mAb的研究及应用获得了长足的进展。由于治疗性mAb具备特杲性强、能够携带其它分子等特点，在临床前和临床研究中获得了其它药物无法达到的疗效，引起了人们极人的关注。为了适合临床应用，对mAb必须进行适当的改造或修饰，以降低或公除人体对mAb的免疫反应，增强mAb的功能。在降低免疫原性方面，mAb经历了鼠源单抗、鼠/人恢合单抗、人源化单抗、人源单抗等几个阶段,鼠源性蛋白的成分逐步减少，最终下降为零。mAb免疫原性下降延长了在体内的半衰期,其携带某种特定的分子，如同位索、等，起到靶向杀伤肿瘤细胞的作用。使长期治疗成为可能。对mAb改造的另一个方向是让细

3、菌壽索、炎性细胞因子、趋化因子或药物前体分子此外，对n)Ab分子结构进行改造，增加与抗原的结合能力和抗体效应功能，也是新型治疗性抗体研究的重耍方向［1,2］。1双特异抗体(Bispecificantibody,BsAb)BsAb是指具冇两种抗原结合特性的抗体，可同时结合两个不同的抗原或抗原决处簇。-与mAb相比，BsAb具有以下优点：(1)较低浓度即对杀伤或溶解肿瘤细胞；(2)对低表达或不农达肿瘤相关抗原的肿瘤细胞有杀伤或抑制作用；⑶激活结合的细胞壽性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL),发挥多种生物学效应,协助杀伤肿瘤细胞。早期研制BsA

4、b的方法是采用细胞工程，即将两株各口分泌不同特异性单克降抗体的杂交瘤细胞再融合得到四源杂交瘤(quadroma),或将一株杂交瘤细胞与免疫的脾细胞融合得到三源杂交瘤，这两种杂交瘤被称为二次杂交瘤(hybrid-hybridoma)<>多倍杂交瘤细胞的稳定性差，BsAb的产量少口活性低，费时费力，临床应用时存在人抗鼠抗体免疫反应(HAMA),因此不适用于临床。20世纪90年代起，基因工程和蛋白质工程在抗体生产和改造中得到了成功应用，由此产生了抗体工程。应用抗体工程生产BsAb,具有分子量小、方法稳定、可大量生产、成本显著降低和操作简便等优点。1996年，Ridgway

5、等人［3］苗次将"knobsintoholes”技术应用到BsAb异源双聚体形成的制备上,此后Merchant［4］和Xie［5］进一•步发展了该技术。knobsintoholes”的设计思路很巧妙，主要是通过突变两条重链结合面上的某些氨基酸，使原来无法结合的免疫球蛋口(Ig)重链牢固结合。通常采用的方法是：将一条IgG重链上CH3结构域中的氨基酸突变为带小侧链的氨基酸(hole),将另一条IgG重链上与之相对应的氨基酸突变为带大侧链的氨基酸(knob),然后共转染编码这两条重链的基因至同一真核宿主细胞表达。由于knob和hole氨基酸特殊的相互作用，使两条重链形成

6、的二聚体可以达到90%以上。2005年，XieZ等［5］应用该技术先将抗人表皮生长因子一2(HER2/neu)和抗CD16两个单-链可变区抗体在同一CH0细胞中实现表达，然后应用人IgGlFc段的CH3结构域将两者结合，形成杲源二聚体形式的BsAbs,该二聚体貝有特杲性结合HER2/neu和CD16的功能。与其它哺乳细胞表达的工程BsAbs相比，该BsAbs产量较高(12〜14mg/L),体外实验显示能够动员人外周单核细胞杀灭SK-BR-3肿瘤细胞，作用明显强于罗氏公司生产的商品化抗IIER2/neu抗体Herceptin。全长型BsAb分子中含有Fc段，由于它能够

7、结合FcY受体(FcxR,—种细胞表面的细胞毒效应触发分子)，故可激活免疫系统的效应细胞以杀死肿瘤细胞。应用抗体工程改造BsAb,使其与FcYR结合能力提高,亦是BsAb研究的一个重要方面。经过改造，BsAb可以与IgA受体(FcaRI)发生高亲和力结合，其作用甚至强于抗FcyR的BsAb对肿瘤细胞的杀伤作用［6］。2抗体一细胞因子融合蛋白(Antibody-cytokinefusionproteins)细胞凶子能激活某些免疫细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、T细胞和B细胞等。应用细胞因了治疗癌症能够引起免疫应答，但这种免疫反应是非特异的，常产处全身毒性。