课题3　血红蛋白的提取和分离 (4)

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1、血红蛋白的提取和分离一、基础自查。1．方法及原理方　法原　理凝胶色谱法电泳法2.实验操作程序(1)样品处理(2)粗分离④图示：⑤注意：透析时间为12h。透析袋是用硝酸纤维素制成，小分子可自由进出，而大分子保留在袋内。(3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。(4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。3．结果分析与评价项　目分　析血液样品的处理分层明显→→凝胶色谱柱的装填血红蛋白的分离特别提醒　①用凝胶色谱法分离和纯化蛋白质，滴加样品时，吸管管

2、口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。②在蛋白质分离过程中，应仔细观察红色区带在洗脱过程中的移动情况，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。一、小试牛刀。1.下列关于血红蛋白分离中样品处理及粗分离的描述，错误的是(　　)。A．红细胞洗涤：此操作的目的是去除红细胞内的杂蛋白B．血红蛋白释放：此操作需要将洗涤好的红细胞放入蒸馏水中C．分离血红蛋白溶液：离心后红色透明液体是血红蛋白的水溶液D．透析：此操作的目的是去除分子量较小的杂质2.（2012·江苏淮安期末）下列关于凝胶色谱法的说法正确的是(　　)

3、A．是根据蛋白质对其他分子的亲和力来分离蛋白质的B．凝胶是一些微小的无孔的球体，小球体都是由多糖类化合物构成的C．相对分子质量较小的蛋白质的路程较长，但移动速度较快D．相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快3.蛋白质的分离与纯化技术是蛋白质研究的重要技术。下列有关叙述不正确的是(　　)A．根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质分离B．根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳分离蛋白质C．根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质D．根据蛋

4、白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质4.(2011·广东理综，24)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是(　　)。A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢5.凝胶色谱技术是二十世纪六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很好的分离效果，目前已经被广泛应用于多个领域，请

5、回答：(1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是________，原因是____________________________________________________________________________________。(2)若选用SephadexG—100，则G表示____________________________________________________________________________________________________________

6、_______。(3)通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步________，在血红蛋白的提取和分离实验中有以下操作，试回答：①实验时要对采集到的血液中的红细胞进行洗涤，洗涤的目的是________________。②在____________作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白。③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样品的________，而透析的目的是_______________________________________________________________________

7、_。④实验最后经过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行_________________________________________________。(4)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现气泡必须重装。这是因为________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8、。