课题3　血红蛋白的提取和分离

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1、课时训练1.(2015·临沂高二检测)凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类很多，但其作用的共同点是(　　)A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C.将酶或细胞固定在凝胶中D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度【解析】选A。凝胶既不会吸附蛋白质，也不会与蛋白质发生反应。凝胶色谱法分离蛋白质的实验利用凝胶颗粒中的多孔通道，改变了蛋白质分子通过凝胶时的路径，使相对分子质量不同的蛋白质得以分离。故B、D项不正确，A项正确。将酶或细胞固定的凝胶用于固定化酶或固定化细胞，C项不正确。

2、2.(2015·吉林高二检测)下列各项中，哪项不是电泳使样品中各分子分离的原因(　　)A.带电性质差异　　　　　　B.分子的大小C.分子的形状D.分子的变性温度【解析】选D。电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，带电性质不同、分子的大小和形状不同都会影响带电粒子在电场中的迁移速度，与分子变性温度无关。3.下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质的分离度的是(　　)A.层析柱的高度B.层析柱的直径C.缓冲溶液D.样品的分布【解析】选B。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱必须有适宜的高度；样品的分布也影响分离度；

3、缓冲溶液的pH影响蛋白质所带的电荷，因此也影响分离度。只有层析柱的直径一般不会影响分离度。4.(2015·滨州高二检测)在蛋白质的提取和分离中，有关样品处理过程的分析正确的是(　　)A.洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B.为了增加透析效果，透析过程中可更换磷酸缓冲液C.为了保证血红蛋白的结构正常，洗涤红细胞要用磷酸缓冲液D.洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果【解析】选B。洗涤红细胞的目的是除去杂蛋白，A项不正确。透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质，其原理是小分子通过半透膜的方

4、式为自由扩散，其透析效果取决于透析液的用量、透析时间等，因此透析过程中更换磷酸缓冲液可以提高透析效果，B项正确。洗涤红细胞时，红细胞未破裂，洗涤液不会影响血红蛋白，因此用0.9%的NaCl溶液保持红细胞不破裂即可，不需要用磷酸缓冲液，C项不正确。洗涤时的离心要低速短时间，速度过快，时间过长，会导致白细胞等一起沉淀，达不到分离的效果，D项不正确。【补偿训练】下列关于血红蛋白提取和分离实验中操作步骤的描述，正确的是(　　)A.红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心B.血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器

5、上充分搅拌C.分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离D.透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH为8.0的磷酸缓冲液中透析5h【解析】选C。对红细胞进行洗涤时，应该加入生理盐水，防止细胞破裂；进行血红蛋白的释放时，需要加入蒸馏水和甲苯，以使红细胞吸水涨破，释放血红蛋白；分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液离心，过滤除去脂溶性沉淀层，用分液漏斗分离出下层红色透明液体；透析时，应将透析袋置于pH为7.0的磷酸缓冲液中透析12h。5.下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是(　　)A.是利用凝胶把分子大小不同的

6、物质分离开的一种方法B.在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出C.凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D.一般情况下，凝胶对待分离的物质没有吸附作用，因此所有待分离的物质都应该被洗脱出来【解题关键】解答本题时应理解两点：(1)凝胶色谱法分离蛋白质的原理：根据相对分子质量大小对蛋白质进行分离。(2)操作过程：凝胶颗粒只会暂时滞留待分离物质，最终都会被洗脱。洗脱时，大分子最先流出，小分子最后流出。【解析】选C。凝胶色谱法是根据相对分

7、子质量大小分离蛋白质的有效方法。凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱过程中最先分离。一般来说，凝胶对待分离的物质没有吸附作用，不会使待分离物质停止运动，最终所有要分离的物质都应该被洗脱出来。选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。6.下列关于凝胶色谱法分离血红蛋白实验中样品的加入和洗脱的叙述中，不正确的是(　　)A.加样前

8、，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.用吸管小心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面C.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内D.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口【解析】选A。加样前，应打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲