DB1302∕T 189-2005 绵羊鲜胚胎移植技术规程

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1、B月n峥UrJ曰卜DB1302犷…色尸‘引卜1山市地方标准DB1302/T189-2005绵羊鲜胚胎移植技术规程2005-11-15发布2005-11-30实施唐山市质量技术监督局发布DB1302/T189-2005月IJ舀本标准由唐山市畜牧水产局提出。本标准起草单位：唐山市丰南区畜牧水产局。本标准主要起草人：孟令会、李永周、李久元、侯建民、王秀清、马云昌、董庆武。本标准附录A和附录B为规范性附录。DB1302/T189-2005绵羊鲜胚胎移植技术规程1范围本标准规定了绵羊鲜胚胎生产中供体羊的选择、超数排卵及配种、手术冲卵技术、胚胎质量鉴定、受体羊的选择和胚胎手术移植技术。本标准适用于绵

2、羊鲜胚胎生产和移植。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标注的条款。凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不使用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本使用于本标准。NY5148无公害食品肉羊饲养兽药使用准则NY5151无公害食品肉羊饲养管理准则3供体羊的选择3.1供体羊应符合绵羊的品种特征，系谱清楚，遗传性稳定，生产性能良好。3.2供体羊健康状况良好，体质健壮，无遗传性和传染性疾病。年龄一般为2.5-7岁，青年羊为12月以上。繁殖机能正常，经产羊没有空胎史。3.3供体

3、羊的饲养管理供体羊在采卵前后应保证良好的饲管条件，不得任意变换草料和管理程序，保持中等以上体膘。供体羊按NY5151,NY5148的规定进行饲养管理。4供体羊的超数排卯及配种4.1超数排卵4.1.1超数排卵的季节和发情周期绵羊最适超数排卵季节为当年9月下旬至次年3月下旬。绵养的发情周期为16-17d04.1.2超数排卵方法4.1.2.1供体羊埋植孕酮栓14d(CIDR)，于第8d换孕酮栓（(CIDR)，同时肌注0.1毫克氯前列烯醇。于第12-14d进行连续3d6次FSH超排注射，每d6:00-7:00和18:00-19:00,注射时间间隔为12h，递减注射。FSH总剂量为200-300单

4、位／只。于第6次注射FSH的同时撤掉孕酮栓（CIDR)，并注射0.1mg氯前列烯醇或孕马血清（PMSG)200国际单位。4.1.2.2确定供体羊发情后立即静脉注射促黄体生成素（LH)75-100单位。注射后2h配种。4.1.3供体羊发情鉴定4.1.3.1时间在第6次注射FSH时即对超排供体羊观察发情。4.1.3.2方法试情公羊扎好试情布，放入母羊群中试情。每30-40只供体羊需1只健康试情公羊，当母羊接受公羊爬跨，站立不动，或母羊围着公羊旋转，并不断摆尾，作为发情的标准。4.2配种4.2.1种公羊的选择种公羊应符合绵羊的品种特征，谱系清楚，遗传性稳定，生产性能优良；健康状况良好，OBI3

5、02/T189-2005体质健壮，无遗传和传染性疾病；繁殖机能正常。4.2.2本交从供体羊接受爬跨进行第一次交配，每8-12h配种1次，直至发情结束。4.2.3人工授精4.2.3.1操作要求a)采精、精液稀释、输精用的器械严格灭菌、消毒。b)采精前对种公羊外生殖器清洗消毒。c)稀释后的精液温度要保持在25℃一30℃的环境中。d)输精前，母羊外阴部必须经过清洗消毒。e)输入的鲜精活力在0.6以上，每次输精有效精子数不少于3X10'，输精次数不少于2次。f)选择适宜的输精部位。4.2.3.2时间确认发情时立即进行第一次输精，之后每间隔8-12h输精一次，直到发情结束。5手术冲卵技术5.1主要

6、器材a)手术车；b)剃须刀；c)创布；d)止血纱布；e)剪毛剪；f)手术刀柄；g）手术剪；h)止血钳；i)巾帕钳；J）持针器；k）肠钳（带乳胶管）；1)手术刀片；m)缝合线；n)缝合针；o)镊子；p)35mm,100圆形培养皿；q）套管针；7＃针头（尖端磨顿）r)16＃针头（尖端磨钝）；s)10咖透明硅胶管；t）注射器50mL,20mL,lOmL;u)吸胚管；v)羊用冲卵管：w）体视显微镜；5.2药品a)75%酒精、5%碘配、新洁尔灭、生理盐水、液体石蜡、双蒸水；b)青霉素、链霉素、牛血清白蛋白、氯化钠（(NaC1)、磷酸二氢钾（KH2PO4)、磷酸氢二钠（Na2HPO怪）、氯化钾（KC

7、1)oDB1302/T189-20055.3试液的配制5.3.1磷酸缓冲盐水（PBS)称取NaCl8.Og,KH2PO40.2g,Na2HPO42.13g,KC10.2g，加双蒸水1000毗，完全溶解后加适量的3MNaOH调pH为7.4，即为PBS液。5.3.2冲卵液量取配置好的PBS液1000毗，加入牛血清白蛋白4g，充分摇匀即成。5.4冲卵步骤5.4.1手术5.4.1.1术前准备手术前24h停止饲喂草料，限量饮水，手术器械在使用