《植物生物学大实验》实践教学指导

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1、《植物生物学大实验》指导（南京农业大学生命科学学院木科生参考用）授课对象：生物技术专业、牛物科学专业、生命科学技术与人才培养基地、生物学理科人才培养基地高年级本科住。实验时间：笫3学年春季或笫4学年秋季的笫1-2n学分：2冃的：系统掌握植物材料培养、试验设计及其实施、生长特征观察、生理特性和形态结构分析等基本方法和技能，培养和增强学牛们发现、思考、分析和协同解决问题的能力。实验形式：5$人分组试验，组内成员明确分工、协同完成本课程规定的各项试验和实验报告。目录第一部分植物培养、生长和生理特性分析11•试验设

2、计12.营养液的配置13.植物生长观察24.植物生理特性分析34」脂质过氧化分析——植物组织中丙二醛（MDA）含量的测定34.2叶绿索荧光动力学参数测定与分析45.数据统计分析56.参考文献5第二部分植物形态与结构分析71•石蜡制片和显微测量与分析方法简述72.植物制片的一般原理与方法82.1植物制片的方法及准备82.2石蜡法制片原理与方法93.显微数码互动系统的使用18第三部分《植物生物学大实验》报告的撰写20附件（Yazici等（2007）参考文献影印件）21准备材料、器血、用具、仪器和试剂用加粗字表示

3、第一部分：植物培养、生长和生理特性分析1.试验设计1.1植物材料：秋季（开学初1・2月）试验，选卅小麦或高羊茅等禾本科植物，或双子叶植物油菜；（春季试验，选用玉米或水稻、甜高粱等禾本科植物，或双子叶植物人豆）。1.2种子处理：每组取100ml塑料烧杯1只，选取上述一种植物人小一致、饱满的种子放入塑料烧杯中，川次氯酸钠或多菌灵乳浊液浸种消毒10-20h,蒸憎水彻底漂洗。室内浸种24h,28-30°C下催芽24h。1.3培苗：每纽取盆钵、盆垫7套，准备适量石英砂（填满4/5盆钵），彻底洗净、平铺于（搪瓷）盘屮晒

4、干、迸烘箱内80°C左右烘干后使用。在装有约2/3石英砂的盆钵屮加等量蒸僻水后，将催好芽的种子均匀间隔移入（每盆约10-15株），再均匀撒盖上剩余石英砂，置温暖（朝南实验室）处生长。幼苗初露后，每隔Id喷水1次。禾本科植物长至1叶1心期（植株具有1张完全展开叶片和1片未展心叶）后，双子叶植物至子叶完全展开后，开始用l/4Hoagland营养液（详细见2.1〜2.4）培养。1.4盐胁迫处理：禾本科植物长至2叶或3叶1心期后，双子叶植物至2・3片真叶完全展开后，每组选定6盆生长良好一致的，标记盆号，取其中3盆为

5、对照，另3盆为150mMNaCl处理，处理期间继续定期加营养液，0,4,8,12d进行非损坏性牛长观察，处理16d后分别按每盆钵内植株地上地下部取样，根据所测项冃，决定所取样品是直接调查、杀青烘于至恒重、还是・20°C下或液氮罐中冷藏备用。2.营养液的配置2.1大量元素的配置按表1屮无机盐排序用蒸饰水依次配證。注意依次溶解后加入100ml烧杯屮，用电子搅拌器充分搅动、溶解后，加入后一种无机盐溶液，最后定容至100ml,倒入100ml瓶屮储备，标签标注组号、日期、大量元索及具浓度。表1大量元索母液的配置无机盐

6、浓度(mg•100ml'1)kno31515Ca(NO3)2・4H2O2360NH4H2PO4287.6MgSO4・7H2O1232.62.2Fe-EDTA的配置：分别溶解13.93mgFeSO4・7H2O和18.63mgNa2EDTAJ：20ml蒸憎水中,加热Na2EDTA溶液后，加入FeS04-7H2O溶液,充分搅拌、冷却后定容到100ml,即为Fe-EDTA储备液。2.3微量元素的配置：依次称取表2屮无机盐，溶于蒸懈水屮，定容到100ml,倒入l（）（）ml塑料或玻璃瓶屮储备，贴上标签（标注组号、配置

7、日期、微量元素及其浓度）。表2微量兀素母液的配置无机盐浓度(mg・lOOml-1)MnCl2・4出042.5H3BO370ZnSO4•7H2O5.75CuSO4•5H2O2H2MOO4・H2O0.51.4培养液及其pH调配：综合配置的100ml培养液屮分别含人量元素母液、Fe-EDTA储备液和微量元素母液各1ml,用1%稀盐酸调整、用精密试纸（pH5-6）或pH计检测，调控培养液的pH在5.5-6Z间。2.植物生长观察：在观察前，设制生长记录表（下表供作参考）于0,4,8,12dNaC1处理后，每盆中标定3

8、株（3盆合计3次重复），连续调查株高、叶长、叶宽、叶片数，16dNaCl处理后，取上述观察的完整植株，仔细除去附着在根系上的石英砂，分别称量地上和地下部样品鲜重（FW）,先后记入表3和表4。将调查过FW的材料，分别放进已用铅笔标记的（组号，样品号）纸袋（信封）中，70°C烘箱屮烘干至恒重（约24-40h）,称干重（DW）,分别计算地上部和地下部组织含水最（%）=（FW-DW）/DWx100。表3活体调杏记录（生长