细胞生物学实验指导(植物版)

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1、细胞生物学实验实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测［实验目的］通过本实验，使学牛巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实人小的感性认识。通过本实验操作，耍求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。［实验原理］应用显微镜的成像原理（详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章笫一节），同时借助显微镜的镜台测微尺和冃镜测微尺，两尺配合使川，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。该实验完成需吋6学时。［实验材料、试剂和仪器］

2、一、仪器普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37°C温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。二、材料洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。三、试剂生理盐水，10pg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4°C保存）一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、取一•张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用银子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10X物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。3、换上暗视野聚光

3、器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。5、换用高倍物镜观察吋，要换用为高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴牛理盐水。川锻子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，进生.理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。2、将装片置于载物台上，在明视野用聚焦螺旋聚焦样品，将观察到的夹竹桃花丝毛细胞移到视野中央。3、换上10X相差物镜和相应的相差聚光器，完全打开聚光器的孔径

4、光阑，装上绿色滤光片，调节光源，使视野内亮度均匀。4、拨出目镜，插入中心望远镜，找到环状光阑的亮环和相板的黑环，调节聚光器，使二者完全重合。5、拔出望远镜，插入目镜，镜检、拍照。6、换用高倍相差物镜观察时，耍换用与Z相匹配的聚光器环状光阑，重复以上调节步骤。三、荧光显微镜观察人口腔上皮细胞1、用灭菌的牙签刮取口腔上皮细胞，涂于洁净的载玻片上，滴上一滴罗丹明123染液,于37°C温箱温育30mino2、盖上盖玻片，吸去多余的液体。3、将装片査于载物台上，10X物镜下找到样品焦面，关闭透射光，置于激发光为蓝光、发射绿色荧光的滤片组合块下观察线粒体。必要的话，可换

5、用40X荧光物镜进一步观察、拍照。四、测微尺的使用操作1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。2、将镜台测微尺冇刻度一1侨朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。3、小心移动镜台测微尺和目镜测微尺（如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦），使两尺左边的〃0〃点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线（图Do4、记录两条重合线间Fl镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算口镜测微尺每格的长度等于多少口山口镜测微尺每格的长度（卩ni）二镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数

6、*103450图1目镜测微尺的标定±：目镜测微尺，F：镜台测微尺五、几种不同类型细胞形态的观察及大小测量1、观察各种装片标本，注意不同类型细胞的形态及大小差异。2、用口镜测微尺和镜台测微尺测量细胞的长、矩径或半径的长度，每类被测物测3个数据，最后取平均值。［实验结果］将上述观察及测量结果记录于下表，并计算细胞的大小。细胞名称形态特征长、短径或半径（微米）细胞而积（平方微米）［注意事项］1、荧光镜下观察细胞时，由于荧光易淬灭，观察时要尽量快。2、荧光探针都有一定的毒性，因此操作时要注意防止污染皮肤和环境，如弄到手上或桌子上，应及时冲洗。［实验报告］1、完成上述

7、表格。2、思考：不同物镜放大倍数下，冃镜测微尺每格的单位是否相同？3、思考：不同类型显微镜的适用范围有何不同？实验二细胞膜的渗透性观察［实验目的］通过本实验，学习、掌握观察、研究细胞膜物质通透性作用的实验方法与技能。了解细胞膜对物质通透性的一般规律。了解溶血现彖及其发生机制。［实验原理］细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一•侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作川是细胞膜的主要功能之一。将红

8、细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞