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1、诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法学验证探析【摘要】通过试验，确认所采用方法适用于诺氟沙星胶囊微生物限度检查。方法：按品种项下微生物限度检查规定对每一试验菌逐一进行验证。结果：诺氟沙星胶囊的微生物限度检查过程需要消除其抑菌性。结论：采用低速离心和薄膜过滤（加入硫酸猛溶液中和）的方法用于诺氟沙星胶囊的微生物限度检查。【关键词】诺氟沙星胶囊微生物限度检查Abstract:Thepaperismainlyaboutthestudyofthevalida.tionofobviouscapsulemicrobiallimitinspectionmethodology
2、.1.验证材料：1.1供试品：诺氟沙星胶囊（0.25g）（批号为:A201009220A201009221A201009222）o1.2培养基及试液：营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、营养肉汤、乳糖胆盐培养基、改良马丁、四硫磺酸钠、胆盐硫乳琼脂、曙红亚甲蓝琼脂、pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液、硫酸牢孟溶液（0.lmol/L,分析纯）。1.3菌种：枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉1.4仪器：电热恒温水浴锅、电动离心沉淀机。2.验证步骤：1菌液的制备：2.1.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌、的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，
3、于30〜351培养18〜24小时，分别取各菌种培养液lml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释，金黄色葡萄球菌稀释至10-5,大肠埃希菌稀释至10-7,枯草芽鞄杆菌稀释至10-5,约为50〜100cfu/ml,备用。2.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23〜28°C培养24〜48小时，取培养液lml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释至10-6,约为50〜100cfu/ml,备用。2.1.3取黑曲霉的新鲜培养物用5ml0.9%无菌氯化钠溶液适量与标准比浊管进行比较，取比浊后的菌悬液lml加入9ml0.9
4、%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释至10-4,约为50〜100cfu/ml,备用。2.2供试液制备：取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液至100ml,水浴（451）保温振摇，分散混匀，作为1：10的供试液。2.3细菌、霉菌及酵母菌数计数验证试验2.3.1试验组：(1)取规定量的供试液，置无菌条件离心(500转/分)3分钟，取上清液置无菌试管中，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液补至原量，混匀后取1ml加至100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液中，并向其中加入0.lmol/L的硫酸猛溶液10ml,混匀，然后按照中国药典2010版附
5、录微生物限度检查法中的薄膜过滤法进行过滤，单膜冲洗量1000ml,并在最后100ml冲洗液中加入相应试验菌液lml,冲洗后取出滤膜，菌面朝上，贴于营养琼脂培养基平板上，置规定条件下培养，每株试验菌平行制备二个平皿。(1)霉菌、酵母菌计数：采用培养基稀释法。取1：10的供试液0.2nd加至平皿中，并加入试验菌液Ind,立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基(温度低于45°C),置规定条件下培养，每株试验菌平行制备二个平皿。2.3.2菌液组：取稀释好的各菌液lml,分别加入平皿中，加入营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，置规定条件培养，测定所加的试验菌数。每株试验菌制
6、备二个平皿。2.3.3供试品对照组：取规定量的供试品，方法同试验组，加入相应的培养基，每株试验菌平行制备2个平皿。2.3.4稀释剂对照组：取稀释剂lml替代供试液，方法同试验组，每株试验菌平行制备2个平皿。2.3.5试验组回收率(%)二■X100%稀释剂对照组菌回收率(%)二■X100%2.3.6培养：细菌计数平板30-35°C培养3天；霉菌、酵母菌计数平板23-28°C培养5天，逐日点计菌数。2.3.7判断标准：稀释剂对照组及试验组的菌回收率应均不低于70%o三次试验结果见表1、表2、表3。4.控制菌检查方法的验证：4.1试验组：取1：10的供试液1
7、0ml,置无菌条件离心(500转/分)3分钟，取上清液置无菌试管中，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液补至原量，混匀后转入100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液中，并向其中加入0.lmol/L的硫酸猛溶液10ml,混匀，然后按照中国药典附录“微生物限度检查法”中薄膜过滤法进行过滤，冲洗量单膜800ml,并在最后100ml冲洗液中加入相应试验菌液lml,冲洗后取出滤膜，加至100ml胆盐乳糖培养基中，置30〜35°C培养18〜24小时。取培养物0.2ml接种至含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未
8、接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。沿
