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《补肾中药诱导骨髓基质干细胞成骨分化动物实验探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、补肾中药诱导骨髓基质干细胞成骨分化动物实验探究［摘要］目的通过动物实验于体外条件下观察补肾中药对大鼠骨髓基质干细胞增殖分化的影响。方法将不同浓度的补肾中药方剂与骨髓基质干细胞体外共同培养，测定细胞增殖功能，检测成骨细胞增殖与分化指标（包括碱性磷酸酶、矿化结节）。结果与空白组比较，浓度100mg/L.200mg/L的补肾中药在不同时间段均可提高骨髓基质干细胞增殖率（P200um边界清晰的结节，为矿化结节的计数标准［1］。1.5统计学方法采用SPSS16.0软件处理，数据以（x±s）表示，多组间采用方差分析，然后行两两t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2
2、结果2.1成骨细胞的鉴定倒置相差显微镜下观察细胞形态，培养Id后大部分的细胞为圆形，大小不等漂浮于培养液；培养2d后部分细胞贴壁，形态主要为梭形、多角形或纺锤形等几种形状（图1）。培养后7d贴壁细胞增多可见伪足，瓶底长满梭形或多角形细胞（图2）；10d可见贴壁细胞形多呈梭形（图3）ovonKossa染色矿化结节（图4）。2.2补肾中药方剂对大鼠MSCs增殖的影响如表1所示，在1d时100mg/组高于空白组(t二6.21,P<0.001),且200mg/组也高于空白组(t二10.27,P<0.001),差异有统计学意义(P<0.05)；在3d时浓度为20mg/
3、L(t=6.89,P<0.001)、40mg/L(t二6.63,P<0.001)、100mg/L(t二14.49,P<0.001)、200mg/L(t二22.21,P<0.001)的0D值均髙于空白组，差异有统计学意义(P<0.05)；在7d时浓度为20mg/L(t=15.39,P<0.001).40mg/L(t二24.36,P<0.001)、100mg/L(t=32.84,P〈0.001)、200mg/L(t=29.80,P<0.001)的0D值均高于空白组，差异有统计学意义(P<0.05)；在10d时浓度为20mg/L(t二38.80,P<0.001)、
4、40mg/L(t=45.13,P〈0.001)、100mg/L(t=37.79,P〈0.001)、200mg/L(t二49.71,P<0.001)的0D值均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)o随着浓度的增高，补肾中药方剂对大鼠MSCs增殖的影响有促进作用。2.3对矿化结节数的影响如表2所示，选取第14天，浓度20mg/L组、40mg/L组、100mg/组、200mg/组的矿化结节数与空白组比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)o说明随着补肾中药浓度的提高，其促进成骨作用逐步增强。3讨论骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的间充质干细胞，它具有多向分化
5、潜能，能够自我更新，可在体外培养。骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下可以向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、心肌细胞等多个方向分化［4］。成骨细胞是体内骨形成的主要细胞也是骨代谢的重要功能细胞，对维持骨的代谢平衡非常重要［5］。成骨细胞功能障碍或数量减少，都会导致骨组织代谢异常、骨质疏松等多种疾病的发生。骨质疏松症在中医学上被认为是肾气虚衰所致，因此近年来越来越多的研究利用补肾中药来治疗骨质疏松症。本研究发现，不同浓度组的补肾中药均可促进骨髓间充质干细胞的增殖，增强碱性磷酸酶的活性。碱性磷酸酶是骨髓间充质干细胞成骨分化的主要特征性酶，也是最早出现的指标
6、，其由成骨细胞产生并可反映分化程度的高低。目前比较普遍的观点认为，碱性磷酸酶在体外的钙化中起着关键的作用［6］,碱性磷酸酶活性的高表达标志着成骨细胞的分化成熟［7］。相较于碱性磷酸酶，矿化结节为骨形成的标志,它的形成代表了细胞进一步成骨分化成熟［8］。本实验结果显示，不同浓度的补肾中药在不同程度上能刺激骨髓间充质干细胞的增殖分化成骨。传统医学认为“肾主藏精”，肾精可以生骨养髓的。本方剂所涵盖的多味补肾中药中部分作为单味中药在体外有促进向骨髓基质干细胞成骨分化的作用。殷晓雪等［9］的研究发现淫羊翟可以上调BMP-2基因的表达，促进成骨细胞的增殖和分化。徐展望等
7、［10］的研究发现补骨脂能促进大鼠成骨细胞的增殖。张立等［11］的研究发现杜仲也能通过刺激成骨细胞的增殖分化促进骨的重建。此外，Wang等［12］的研究指出骨碎补能促进人成骨细胞增殖作用。本实验中的补肾中药是在上述单味补肾药物的基础上经过组合构成，它能够促进大鼠体外骨髓间充质干细胞增殖及其向成骨细胞分化。通过本实验可以发现，补肾中药对骨髓基质干细胞增值的影响。在低浓度不但没有毒害作用，而且随着浓度的增加,细胞增值作用递增。中药具有诱导分化的作用，和空白组相比(空白组也加入了诱导成骨液)，中药有诱导基质干细胞向成骨细胞分化的作用。中期的ALP和细胞分化成熟晚期
8、的矿化结节表明，药物对细胞的分化成熟作用明显，特别是
