乙烯雌酚诱导兔骨髓基质干细胞向成骨分化的实验研究

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1、乙烯雌酚诱导兔骨髓基质干细胞向成骨分化的实验研究：张世民，吕刚，梅晰凡，胡萌【摘要】目的观察乙烯雌酚(Diethylstilbestrol)对兔骨髓基质干细胞(bonemarroalcells，BMSCs)成骨分化的影响，探讨乙烯雌酚对骨髓基质干细胞的成骨调节及其对骨骼系统的影响。方法用不同浓度(0,10-10～10-5mol/L)乙烯雌酚干预1周龄新西兰长耳白兔的骨髓基质干细胞，并设地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、维生素C50mg/L为阳性对照，在干预不同时间分别用茜素红染色鉴定钙化

2、结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)活性。结果10-8mol/L乙烯雌酚干预25天后开始出现钙化结节;10-8、10-7mol/L乙烯雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加。结论乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化，并能通过成骨细胞的数量来发挥骨骼系统的保护作用。【关键词】乙烯雌酚;骨髓基质干细胞;成骨分化Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofdiethylstilbestrolontheosteogenicdiffere

3、ntiationofrabbitbonemarroalcellandtodiscusstheregulativeeffectofcoumestrolonbonemarroalcells.MethodsThepresentstudyfirstlyintervenedBMSCsobtainedfrom1-ol/L),orDexamethasone10-8mol/L,β-SodiumGlycerophosphate10mmol/L,vitaminC50mg/Lforpositivecontrol.Then,Calciu

4、mnodesaticbiochemistryAnalyzer.ResultsOsteogenicdifferentiation:BMSCsinducedtoosteogenesisformedmineralizednodularstructuresafter25daysin10-8mol/Ldiethylstilbestrolgroup，CellALPactivityol/Ldiethylstilbestrol.ConclusionsDiethylstilbestrolhasanenhancingeffecton

5、theproliferationandosteogenicdifferentiationofbonemarroalcells.　　Keyarroalcells;osteogenicdifferentiation　　目前，随着我国逐步进入老龄化社会,老年女性的骨质疏松等疾病的发病率明显上升，究其原因可能与年龄增长后体内激素含量降低有关。然而，激素替代疗法(Hormonereplacementtherapy，HRT)因激素带来的诸多的副作用，使其在绝经后老年妇女中的应用受到很大的限制。已有研究表明：食用富含植物雌激素

6、食物的亚洲人，其乳腺癌、前列腺癌及骨质疏松症等疾病的发病率较白种人低。但是，雌激素骨髓基质干细胞(BMSCs)作用的报道很少。为观察雌激素对骨髓基质干细胞的直接作用，本实验拟通过用乙烯雌酚干预体外培养的兔骨髓基质干细胞，观察其对骨髓基质干细胞成骨分化的影响，初步探索雌激素对骨骼系统的作用及其作用机制。　　1材料和方法　　1.1主要材料新西兰长耳白家兔(由辽宁医学院动物饲养中心提供)，LG-DMEM(低糖DMEM，GibcoBRL)，FBS(胎牛血清，杭州四季青)，全自动生化仪，茜素红试剂盒(北京科美东雅公司)，T

7、RIzol(细胞裂解液，KataraLtd.USA)，胰酶、MTT(噻唑兰)、DMSO(二甲基亚砜)、Diethylstilbestrol(乙烯雌酚)，其余试剂均为国产分析纯。　　1.2细胞培养　　1.2.1提取BMSCs取1周龄新西兰长耳白家兔，将家兔拉颈处死，75%酒精浸泡10min，用碘伏消毒，之后无菌条件下取双侧股骨和胫骨，切除两端骨骺，显露骨髓腔。DMEM培养液冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，用Percoll分离骨髓中的有核细胞，1000r/min离心5min，再用DMEM洗1次，收集BMSCs进行原代培

8、养。　　1.2.2BMSCs原代培养取材成功后，将收集到的纯度较高的BMSCs重悬于含DMEM培养液中，并将细胞悬液以1×106/mL密度接种于50mL细胞培养瓶，置于37　℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。原代培养过程中，分别在接种于细胞培养瓶后的8、16、24h和48h时用倒置显微镜对细胞的贴壁及生长情况进行观察。原代接种后48h进行首次半量换液。以后每隔3～4天全