细胞生物学实验指导终)

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1、细胞生物学实验指导黄石理工学院医学院微生物免疫学教研室2009年4月刖B《细胞生物学》实验课的目的，主要在于进行细胞生物学基本技能的训练，验证部分基本原理，培养科学思维方法、学习作风以及独立分析问题和解决问题的能力。细胞生物学是从显微水平、超微水平和分子水平等三个层次研究细胞结构、功能、代谢等的一门学科。细胞牛物学是药学本科牛的专业一门車要基础课程。为适应廿前教学工作的需要，培养实用型人才，提高学牛的动手能力，在院系的组织支持下，在全体编者的共同努力下，完成了这本细胞生物学实验指导，希望能借此提高学牛的实验课质量，有助于学生对棊木理论、基木知识和慕木技能的掌握。木实验指导根据供药院校对本科

2、牛的教学要求，遵循适用性、科学性和启发性的原则，从实验H的、实验原理、实验材料、实验方法、实验结果等方而入手，较为系统地介绍了细胞生物学的实验内容和基本实验技术。根据木课程内容分掌握和了解部分的两级要求，重点突出，详细编写了验证性实验、综合性实验和选择设计性实验内容，力求实用、简明、淸晰。便于学牛在有限的时间内抓住重点加深对理论知识的理解，掌握相应的基本技能，培养和训练于-脑并用、学会发现问题、思索问题并启发学牛解决问题，培养学牛养成实事求是和科学求真的好习惯。本实验指导在编写过程中，借鉴了其他大学的实习指导，在此向编写实习指导的作者表示诚挚的感谢!本实验指导适用于药学木科专业和相应专业实

3、验教学使用。由于编者水平有限，以及编写时间较仓促，实验指导中难免存在缺点和不足，不当Z处敬请老师和同学们不吝指止。我们将在今后的教学工作中不断加以补充和完善。编者2009年7月病原生物学和免疫学的教学要求和方法2实验一3细胞膜的通透性观察实验二6线粒体的超活染色与观察实验三8细胞内过氧化酶的显示实验四10酸性磷酸酶的显示方法实验五12细胞骨架系统的显示与观察实验一细胞膜的通透性观察一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的-•般规律。2.了解溶血现象及其发生机制。二、实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同

4、的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压离的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能z—。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，山不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋片溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，市于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需吋间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。木实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。三、实验用品（一）材料绵

5、羊血细胞（二）器材普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml试管、10ml刻度离心管、试管架,2ml注射器（无需针头）或5ml移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。(三)试剂1.Alsever溶液衙萄糖2.05g柠檬酸钠(Na9C6H507.2II20)0.89g柠檬酸(C6H607.H20)0.05g氯化钠0.42g蒸绸水100ml调PH至7.2,过滤灭菌或高压灭菌lOmin,置4°C冰箱保存。2.0.128mol/LNaCl溶液。3.0.05mol/LNaCl溶液。4.0.4mol/LNaCl溶液。3.0.128mol/LNH4C1溶液。4.0.128mol/LNH4AC溶液

6、。1.0.128mol/LNaN03溶液。7.0.32mol/L葡萄糖。8.0.32mol/L甘油。9.0.32mol/L乙醇。10.0.32mol/L丙酮。11.蒸憾水。四、实验操作1.从购买绵羊血取5ml（防止污染），放入盛有20mlAlsever?s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。2.使用前，取用Alseve^s液保存的新鲜血5ml,加入8ml的0.128mol/L的NaCl溶液,小心混匀,1000r/min离心5min,如此3次洗涤,最后配成30%的红细胞（CRBC）悬液。3.取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml,作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混

7、匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。五、观察结果1•试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（一），镜检红细胞完好呈双凹盘状。2.如杲试管内液体混浊，上层帯红色者，称不完全溶血（+或++）,镜检有部分红细胞呈碎片。3.如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（+++）,镜检发现细胞全部呈碎片。六、实验建议1.血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。2.口测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，