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1、质粒抽提质粒浓度测定操作步骤（使用超微量分光光度计进行）1>打开电脑中NanoDrop程序，选择NucleicAcid测定。2、选择抽捉试剂盒中的TB作为标准液，吸取2yL擦洗超微量分光光度计（NanoDrop2000）检测头，用擦手纸擦洗两次。（注意移液枪滴注的手法，用手托着枪头，如此更加稳定）3、再次吸取2glTB滴入检测头，点击Blank调零。4、吸取2卩1样本，滴入检测头，在SampleID屮输入检测的质粒名称（质粒名称—日期一标号L5、点击Measure,开始测量样本（检测前样本需打匀数次）。6、样木评价，260/280在1.9〜2.0之间样木即为标准。若260/230质
2、粒浓度（Cone）在EP管盖上标注浓度，以Mg/
3、iL为单位。7、测定结果图片保存：打开画图程序，先把程序里的图片显示好，按PrintScreen键，再点击画图程序,按Ctrl+V键复制图像，再粘贴到Excel程序内。V>质粒核酸电泳DNA能够进行电泳的原理：碱基、磷酸和戊糖三种成分连接构成核甘酸，分为脱氧核糖核昔酸和核糖核昔酸。脱氧核糖核昔酸组成的长链，即是DNA带均匀负电荷。DNA分了量的描述:生物学上描述DNA常用的kb、nt、bp表示。kbT"碱基对kilobasent核昔酸nucleotidebp碱基对basepair（1）核酸电泳凝胶配制步骤（每块电泳胶用量为50ml）
4、1>1XTAEbuffer(50ml)+agarose(重量比例为1%,0.5g)摇匀后放入微波炉2min加热溶解（加热时需用擦手纸盖住瓶口2、加入Gelred（体积比例为1:10000,5pL）,摇匀后倒入配胶架，放置室温凝固约30mino（如想加快时间，可以放置49冰箱冷冻加速变硬）不过最好是常温凝固25min后，再放入冰箱10min,效果更佳。（2）核酸电泳跑胶步骤：1＞吸取6X核酸loadingbuffer2
5、iL+10pL质粒样本打匀待用。（先在不透水纸张上滴好loadingbuffer,再加入质粒样本，不同样本换枪头防止污染）2、凝胶放入电泳槽屮滴加样本，吸取10gLM
6、arker滴加至凝胶孔屮，再依次加入上样后的质粒样本。根據質粒濃度再加以選擇3、开始电泳（电压190V,电流400mA）,时间约为20-39mino（3）核酸凝胶摄影步骤：1、打开ImageLab软件，在文件里查找最近的协议，点击“sunyunfu”。2、点击“放置凝胶”开始放入凝胶置操作台中，台上多余的液体用纸擦干，防止在关闭机器的时候震动造成移位。3、观察凝胶放正之后，点击“运行协议”进行摄影。4、摄影完毕后，调节亮度观察是否出现相应的质粒样木。5、点击快照，保存图片。材料q—度量衡lm=100cm=103mm=106p,m=109nmlg=10‘mg=106
7、ig=109ng
8、agarose琼脂糖agaroseelectrophoresis琼脂糖电泳agarosegel琼脂糖凝胶材料1Marker：Marker跑出來的每条条带人小是己知的，用它和目的产物--起跑电泳,就可以通过比对条带位置，知道目的产物的人小（分子最）。材料2核酸电泳上样缓冲液（6Xloadingbuffer）loadingbuffer的中文名字叫上样缓冲液，6X的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是滉酚蓝，代表的片段大小是300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。loadingbuffer的功能主耍有两个：第一，里边的指示剂漠酚蓝和二甲苯酚起到
9、指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分廿油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上彩响它的迁移速率。loadingbuffer,・20°C冷冻保存材料3——TAEBuffer——用J：核酸电泳实验（T—Tris碱；A—醋酸AceticAcid；E—EDTA（络合剂））TAE是使用蝕广泛的缓冲系统。TAE的优点是超螺旋在其小电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子
10、质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较英他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，t时间电泳（如过夜）不可选用，除非冇循环装置使两极的缓冲液得到交换。50xTAEBuffer的配制方法：（实验室一般制备50X的原液，然后再稀释）1、称量Tris碱242g,Na2EDTA.2H2O37.2g于1L烧杯中;2、向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌
